目的觀察新藤黃酸(gambogenic acid,GNA)對(duì)人肝癌細(xì)胞BEL-7402自噬的影響,為GNA抗腫瘤研究提供理論依據(jù)。方法體外培養(yǎng)人肝癌BEL-7402細(xì)胞株,采用MTT法檢測(cè)GNA對(duì)人肝癌細(xì)胞BEL-7402存活率的影響;倒置顯微鏡觀察給藥前后細(xì)胞形態(tài)變化;單丹磺酰尸胺(monodansylcadaverine,MDC)染色,熒光顯微鏡觀察細(xì)胞自噬小體;透射電子顯微鏡進(jìn)一步觀察自噬小體;Western blot法檢測(cè)自噬相關(guān)蛋白微管相關(guān)蛋白1輕鏈3(microtubule associated protein 1light chain 3,LC3)和p62、Beclin1的表達(dá)水平及加入自噬誘導(dǎo)劑雷帕霉素(rapamycin,Rap)和自噬抑制劑氯喹(chloroquine,CQ)后自噬相關(guān)蛋白的表達(dá)情況。結(jié)果 GNA能顯著抑制人肝癌細(xì)胞BEL-7402的增殖并呈時(shí)效及量效關(guān)系;倒置顯微鏡觀察結(jié)果顯示GNA組細(xì)胞隨藥物濃度增大,細(xì)胞懸浮增多,高濃度給藥組細(xì)胞出現(xiàn)碎片化;熒光顯微鏡下觀察結(jié)果顯示,隨藥物濃度的增加,熒光點(diǎn)狀聚集增多;透射電子顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn),隨GNA濃度的增加...

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圖1GNA對(duì)人肝癌細(xì)胞BEL-7402存活率的影響（±s,n=3)

不同濃度的GNA作用于BEL-7402細(xì)胞24、48、72h后，BEL-7402細(xì)胞存活率隨時(shí)間和劑量依賴性降低，IC50分別為6.408、4.077、3.001μmol/L。見圖1。3.2GNA對(duì)人肝癌細(xì)胞BEL-7402形態(tài)的影響

圖5GNA對(duì)人肝癌細(xì)胞BEL-7402自噬相關(guān)蛋白表達(dá)的影響（±s,n=3)

不同濃度（1.5、3、6μmol/L)GNA作用細(xì)胞24h后，隨藥物濃度的增加，Beclin1、p62和LC3-Ⅱ蛋白表達(dá)水平均顯著增加（P<0.05),LC3-Ⅰ蛋白水平無(wú)明顯變化；Rap組各自噬相關(guān)蛋白的表達(dá)說(shuō)明Rap可誘導(dǎo)人肝癌BEL-7402細(xì)胞發(fā)生自噬（見圖5Ⅰ）。單獨(dú)....

圖2倒置顯微鏡下觀察GNA對(duì)人肝癌細(xì)胞BEL-7402形態(tài)的影響（10×40倍）

空白對(duì)照組細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)，細(xì)胞數(shù)目較多且排列緊密，胞質(zhì)均勻透明；Rap組細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)較少，細(xì)胞脫落、懸浮增加，形狀不一，細(xì)胞碎片化；不同濃度GNA組，隨藥物濃度增加，細(xì)胞貼壁數(shù)量減少，排列不緊密，細(xì)胞懸浮增加，高濃度GNA組出現(xiàn)細(xì)胞碎片化。見圖2。圖2倒置顯微鏡下觀察GNA對(duì)人肝....

圖2倒置顯微鏡下觀察GNA對(duì)人肝癌細(xì)胞BEL-7402形態(tài)的影響（10×40倍）

圖2倒置顯微鏡下觀察GNA對(duì)人肝癌細(xì)胞BEL-7402形態(tài)的影響（10×40倍）3.3GNA對(duì)人肝癌細(xì)胞BEL-7402自噬小體形成的影響

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