發(fā)布時間：2023-11-24 17:31

　　肝癌由于其高復發(fā)率和高轉移率,死亡率一直居高不下。在肝癌的惡性演進中,上皮間充質(zhì)轉變發(fā)揮著重要的作用。SLUG蛋白作為上皮間充質(zhì)轉變中重要的轉錄因子,能通過抑制E-鈣粘素的表達促進腫瘤細胞的上皮間充質(zhì)轉變。因此,SLUG及其互作蛋白可以作為開發(fā)抗肝癌藥物的潛在靶點。本課題通過親和純化及LC-MS/MS、免疫共沉淀、免疫熒光及超高分辨等實驗發(fā)現(xiàn)并證實去泛素化酶USP5能與SLUG互作且兩者存在共定位關系。放線菌酮追蹤實驗及泛素化分析的結果進一步表明了USP5能夠去泛素化SLUG從而穩(wěn)定SLUG。進一步的細胞實驗結果顯示敲低USP5抑制肝癌細胞的上皮間充質(zhì)轉變。對肝癌樣本的臨床數(shù)據(jù)分析也表明,肝細胞癌組織中USP5和SLUG的轉錄水平明顯高于正常組織。并且,兩者的表達水平與腫瘤組織學分級及預后情況密切相關。另外,USP5的表達量也與EMT標志物、相關的轉錄因子及轉移相關蛋白的表達量也有關。因此,USP5可以作為開發(fā)抗肝癌藥物的靶點。通過對傳統(tǒng)中藥單體文庫進行虛擬篩選,發(fā)現(xiàn)芒柄花黃素能特異性的結合USP5。進一步研究表明芒柄花黃素能抑制USP5去泛素化SLUG。體內(nèi)及體外藥效學實驗結果表明芒...

【文章頁數(shù)】：58 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 引言
    第一節(jié) 肝癌及上皮間充質(zhì)轉變的概述
        1.1.1 肝癌的概述
        1.1.2 上皮間充質(zhì)轉變的概述
    第二節(jié) 泛素化及USP5蛋白的概述
        1.2.1 泛素化簡介
        1.2.2 USP5蛋白簡介
    第三節(jié) 芒柄花黃素簡介及藥理作用
        1.3.1 芒柄花黃素簡介
        1.3.2 芒柄花黃素的藥理作用
    第四節(jié) 實驗設計方案
        1.4.1 研究目的
        1.4.2 實驗內(nèi)容
第二章 實驗材料與方法
    第一節(jié) 實驗材料
        2.1.1 實驗細胞系
        2.1.2 實驗試劑
        2.1.3 細胞耗材及儀器
        2.1.4 實驗試劑的配制
    第二節(jié) 實驗方法
        2.2.1 實驗細胞的培養(yǎng)
        2.2.2 免疫印跡(WB)
        2.2.3 免疫沉淀(COIP)
        2.2.4 親和免疫純化和銀染
        2.2.5 快速蛋白液相色譜(FPLC)
        2.2.6 免疫熒光
        2.2.7 體內(nèi)去泛素化分析
        2.2.8 超高分辨實驗
        2.2.9 Biacore
        2.2.10 掃描電鏡
        2.2.11 遷移侵襲實驗方法
        2.2.12 動物實驗方法
        2.2.13 計算機模擬
        2.2.14 基因富集分析
第三章 實驗結果與討論
    第一節(jié) USP5去泛素化SLUG促進肝癌的惡性進展
        3.1.1 SLUG與USP5互作
        3.1.2 USP5去泛素化SLUG從而穩(wěn)定SLUG
        3.1.3 抑制USP5能夠抑制肝癌的EMT
        3.1.4 USP5和SLUG的表達水平與肝細胞癌的惡性程度密切相關
    第二節(jié) 芒柄花黃素靶向USP5抑制其去泛素化SLUG從而抑制肝癌的惡性進展
        3.2.1 芒柄花黃素靶向USP5抑制其去泛素化SLUG
        3.2.2 芒柄花黃素抑制肝癌細胞的侵襲及轉移
    第三節(jié) 討論
第四章 結論與展望
參考文獻
致謝
個人簡歷 在學期間發(fā)表的學術論文與研究成果



本文編號：3866267