目的:作為茄科酸漿屬植物的主要活性物質(zhì),酸漿苦素B具有非常廣譜的生物活性,例如:抗炎、免疫調(diào)節(jié)和抗腫瘤。然而其在非小細(xì)胞肺癌中的作用和機(jī)制尚未明確闡明。我們前期研究發(fā)現(xiàn),肺部組織可能是酸漿苦素B作用的靶向器官,同時(shí)其對(duì)A549細(xì)胞具有很好細(xì)胞毒作用。為了深入探究上述問題,本課題以人的非小細(xì)胞肺癌A549細(xì)胞作為研究對(duì)象,觀察酸漿苦素B對(duì)該細(xì)胞的增殖抑制、周期調(diào)控及凋亡誘導(dǎo)等方面的作用,并對(duì)相關(guān)作用機(jī)制進(jìn)行探究,進(jìn)而為藥物的開發(fā)提供新的思路。方法:(1)結(jié)合實(shí)時(shí)無標(biāo)記細(xì)胞分析技術(shù)和統(tǒng)計(jì)學(xué)方法分析酸漿苦素B對(duì)A549細(xì)胞的增殖抑制作用;(2)運(yùn)用流式細(xì)胞術(shù)觀察酸漿苦素B對(duì)A549細(xì)胞周期、凋亡率的干預(yù)作用;(3)運(yùn)用western bolt和real-time PCR技術(shù)檢測(cè)酸漿苦素B作用下p53、p21、CDC2和Cyclin B1蛋白及mRNA表達(dá)水平的變化,揭示其影響細(xì)胞周期及誘導(dǎo)凋亡的相關(guān)機(jī)制;(4)運(yùn)用免疫熒光技術(shù)分析酸漿苦素B對(duì)胞內(nèi)線粒體形態(tài)的影響;(5)運(yùn)用海馬能量代謝分析系統(tǒng)分析酸漿苦素B對(duì)線粒體呼吸鏈功能影響;(6)運(yùn)用流式細(xì)胞術(shù)分析酸漿苦素B作用下,線粒體膜電勢(shì)和活性氧...

【文章頁數(shù)】：75 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
致謝
中文摘要
Abstract
中英文縮略詞表
1 緒論
    1.1 研究背景
    1.2 細(xì)胞凋亡
        1.2.1 細(xì)胞凋亡概念
        1.2.2 線粒體與細(xì)胞凋亡
    1.3 細(xì)胞周期
        1.3.1 細(xì)胞周期概念
        1.3.2 線粒體與細(xì)胞周期
    1.4 酸漿苦素B的研究進(jìn)展
    1.5 本課題的研究思路
2 材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞株
    2.2 實(shí)驗(yàn)藥物
    2.3 實(shí)驗(yàn)試劑
        2.3.1 化學(xué)試劑
        2.3.2 抗體
        2.3.3 試劑盒
    2.4 實(shí)驗(yàn)儀器
    2.5 實(shí)驗(yàn)方法
        2.5.1 PB藥物的配制法
        2.5.2 培養(yǎng)基的配制
        2.5.3 細(xì)胞培養(yǎng)與傳代
        2.5.4 細(xì)胞計(jì)數(shù)(血球板計(jì)數(shù)法)
        2.5.5 實(shí)時(shí)無標(biāo)記細(xì)胞分析術(shù)檢測(cè)細(xì)胞增殖
        2.5.6 Annexin V-FITC/PI雙染法檢測(cè)早期細(xì)胞凋亡
        2.5.7 細(xì)胞周期檢測(cè)
        2.5.8 線粒體膜電勢(shì)(MMP)檢測(cè)
        2.5.9 線粒體內(nèi)活性氧(ROS)檢測(cè)
        2.5.10 BCA法測(cè)定蛋白濃度
        2.5.11 蛋白免疫印跡
        2.5.12 real-time PCR
        2.5.13 氧耗速率測(cè)定
        2.5.14 分光光度法檢測(cè)caspase活性
        2.5.15 ATP檢測(cè)
        2.5.16 統(tǒng)計(jì)分析
3 結(jié)果
    3.1 PB抑制A549細(xì)胞增殖
    3.2 PB誘導(dǎo)A549細(xì)胞發(fā)生G₂/M細(xì)胞周期阻滯
    3.3 PB導(dǎo)致線粒體形態(tài)變化
    3.4 PB下調(diào)線粒體呼吸鏈復(fù)合物表達(dá)
    3.5 PB導(dǎo)致線粒體呼吸功能損傷
    3.6 PB降低A549細(xì)胞ATP產(chǎn)量
    3.7 PB誘導(dǎo)A549細(xì)胞線粒體膜電勢(shì)下降
    3.8 PB誘導(dǎo)A549細(xì)胞氧化應(yīng)激
    3.9 PB誘導(dǎo)A549細(xì)胞凋亡
4 討論
5 結(jié)論
6 展望
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
作者簡(jiǎn)歷



本文編號(hào)：3858211