目的:探討腸復(fù)方及拆方對腸癌髓源抑制性細(xì)胞(MDSCs)誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(i NOS)及精氨酸酶1(ARG1)表達(dá)的影響。方法:采用不同濃度的腸復(fù)方干預(yù)腸癌CT26細(xì)胞,運(yùn)用MTT法檢測增殖情況,并探索腸復(fù)方最佳濃度及時(shí)間。建立小鼠結(jié)腸癌皮下移植瘤模型,21 d后取荷瘤小鼠脾臟,免疫磁珠法提取和流式細(xì)胞術(shù)檢測MDSCs細(xì)胞。結(jié)合MTT試驗(yàn)篩選出抑制效果最佳的腸復(fù)方濃度,將20只大鼠,隨機(jī)分為腸復(fù)方全方組、香菇多糖組、模型組、拆方Ⅰ組(健脾益氣扶正)及拆方Ⅱ組(祛濕化瘀解毒),每組4只,制備含藥血清,分組干預(yù)MDSCs細(xì)胞。運(yùn)用Western blotting和RT-PCR法檢測5組MDSCs細(xì)胞i NOS及ARG1的表達(dá)。結(jié)果:MTT檢測顯示腸復(fù)方全方對CT26細(xì)胞增殖有明顯的抑制作用,且含藥血清干預(yù)72 h較干預(yù)24、48 h增殖抑制作用更強(qiáng),與時(shí)間呈正相關(guān)(P<0.05),腸復(fù)方中劑量組在不同干預(yù)時(shí)間段對細(xì)胞增殖的抑制作用均明顯強(qiáng)于高、低劑量組(P<0.05)。通過流式細(xì)胞術(shù)檢測小鼠脾臟MDSCs細(xì)胞為活性90%,純度86.65%,Real-time PCR結(jié)果顯示:...

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【文章目錄】：
1 實(shí)驗(yàn)材料
    1.1 細(xì)胞株
    1.2 實(shí)驗(yàn)動物
    1.3藥物
    1.4 試劑
    1.5 主要儀器
2 實(shí)驗(yàn)方法
    2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
    2.2 腸復(fù)方含藥血清制備與分組
    2.3 MTT法檢測細(xì)胞增殖抑制試驗(yàn)
    2.4 建立皮下移植瘤模型
    2.5 脾臟細(xì)胞分離
    2.6 免疫磁珠法分離小鼠脾臟MDSCs細(xì)胞
    2.7 Real-time PCR法檢測MDSCs中iNOS
    2.8 Western blotting檢測MDSCs中iNOS、ARG1蛋白表達(dá)
    2.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
3 結(jié)果
    3.1 各組含藥血清對腸癌CT26細(xì)胞增殖抑制的影響
    3.2 流式細(xì)胞術(shù)檢測荷瘤小鼠脾臟MDSCs的活性及純度
    3.3各組含藥血清對MDSCs細(xì)胞i NOS mRNA、ARG1 mRNA表達(dá)的影響
    3.4 Western blotting檢測含藥血清對MDSCs細(xì)胞iNOS、ARG1蛋白表達(dá)的影響
4討論



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