Graves病是以甲狀腺激素分泌增多為特征的器官特異性自身免疫疾病,是導(dǎo)致甲狀腺功能亢進(jìn)最常見的原因,其發(fā)病率約占甲亢的80⁸5%。目前抗甲狀腺藥物(ATD)是該病最常用的治療方法,但其治療時間長,停藥指征不明確,停藥后復(fù)發(fā)率高,成為該病治療存在的最大難題。因此,尋找更為可靠、有效的治療方法,縮短療程,改善預(yù)后,降低復(fù)發(fā)率是目前Graves病研究的熱點(diǎn)。研究發(fā)現(xiàn),Graves病患者體內(nèi)促甲狀腺激素受體抗體(TRAb)水平以及甲狀腺的腫大程度與疾病的復(fù)發(fā)密切相關(guān),而氧化應(yīng)激是導(dǎo)致Graves病自身免疫紊亂、介導(dǎo)細(xì)胞凋亡并影響甲狀腺腫大程度的重要因素之一。因此從氧化應(yīng)激的角度探討Graves病的防治具有較大的臨床價值,本實(shí)驗(yàn)以氧化應(yīng)激為切入點(diǎn),在探討丹梔復(fù)方治療Graves病小鼠的量-效與時-效關(guān)系的同時運(yùn)用現(xiàn)代分子生物學(xué)技術(shù)進(jìn)一步對丹梔復(fù)方從“肝”論治法改善Graves病預(yù)后、降低復(fù)發(fā)的機(jī)制進(jìn)行深入研究。目的:本研究以表達(dá)促甲狀腺激素受體A亞單位的重組腺病毒(Ad-TSHR-289)構(gòu)建Graves病小鼠模型,觀察具有疏肝理氣、清熱滋陰作用的丹梔復(fù)方對Graves病...

【文章頁數(shù)】：127 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
縮略詞表
引言
實(shí)驗(yàn)研究
    一.Graves病小鼠模型的建立及評價
        1.材料
            1.1 實(shí)驗(yàn)動物
            1.2 飼養(yǎng)環(huán)境及飼料
            1.3 造模藥物
            1.4 主要儀器
            1.5 主要試劑及耗材
        2.Ad-TSHR-289的擴(kuò)增、濃縮、純化與滴度測定
            2.1 質(zhì)粒制備
            2.2 AdCMV_TSHR289/Flag(Dsredexpress2)腺病毒包裝、純化與滴度檢測
        3.隨機(jī)分組及給藥方法
            3.1 分組及給藥方法
            3.2 病毒免疫方法
            3.3 免疫周期
        4.觀察指標(biāo)及方法
            4.1 標(biāo)本采集和處理
            4.2 檢測指標(biāo)
        5.統(tǒng)計(jì)方法
        6.實(shí)驗(yàn)結(jié)果
            6.1 小鼠的一般情況比較
            6.2 造模期各組小鼠每周平均攝食量比較
            6.3 造模期各組小鼠每周平均飲水量比較
            6.4 造模期各組小鼠每周體重比較
            6.5 造模期各組小鼠每周體溫比較
            6.6 造模期各組小鼠T3、T4、TRAb水平比較
            6.7 甲狀腺病理結(jié)果
        討論
            1.Graves病動物模型造模方法的探討
                1.1 Ad-TSHR-289造模的干預(yù)模式探討
                1.2 小鼠種系及性別的選擇
            2.動物模型的評價
        小結(jié)
    二.丹梔復(fù)方治療Graves病小鼠的量-效與時-效關(guān)系研究
        1.材料
            1.1 實(shí)驗(yàn)動物
            1.2 飼養(yǎng)的環(huán)境及飼料
            1.3 實(shí)驗(yàn)藥品
            1.4 主要試劑及測試盒
            1.5 主要儀器和材料
        2.實(shí)驗(yàn)方法
            2.1 分組
            2.2 給藥方法
        3.觀測指標(biāo)及檢測
            3.1 小鼠的一般情況
            3.2 小鼠的飲食、飲水量
            3.3 小鼠的體溫、體重
            3.4 小鼠甲狀腺病理
            3.5 小鼠血清T3、T4、TSH、TRAb水平
            3.6 小鼠肝臟MDA、SOD、CAT水平
        4.統(tǒng)計(jì)方法
        5.結(jié)果
            5.1 各組小鼠一般情況比較
            5.2 小鼠血清檢測結(jié)果
            5.3 小鼠肝臟氧化應(yīng)激指標(biāo)結(jié)果
            5.4 甲狀腺病理結(jié)果
        討論
            1.復(fù)發(fā)率高是Graves病治療亟待解決的難題
            2.肝氣郁滯是Graves病的病機(jī)關(guān)鍵
            3.肝與甲狀腺的內(nèi)在聯(lián)系支持Graves病從“肝”論治的可行性
            4.從“肝”論治Graves病古有淵源,且臨床療效確切
            5.丹梔復(fù)方體現(xiàn)從“肝”論治思想
                5.1 丹梔復(fù)方的選方依據(jù)
                5.2 丹梔復(fù)方的前期臨床觀察
                5.3 丹梔復(fù)方的組方原理
                5.4 現(xiàn)代藥理學(xué)的研究
            6.陽性對照藥物的選擇
        小結(jié)
    三、丹梔復(fù)方對肝臟Nrf-2/HO-1信號通路及甲狀腺組織Bcl-2、Bax的影響
        1.材料
            1.1 實(shí)驗(yàn)動物
            1.2 實(shí)驗(yàn)藥品
            1.3 主要試劑及測試盒
            1.4 主要儀器和材料
        2.給藥方法
        3.觀測指標(biāo)及檢測
            3.1 Real-TimePCR檢測肝細(xì)胞中Nrf-2、HO-1基因表達(dá)
            3.2 WesternBlot法檢測肝臟中Nrf-2、HO-1蛋白及甲狀腺組織中Bcl-2、Bax的表達(dá)
        4.統(tǒng)計(jì)方法
        5.結(jié)果
            5.1 各組小鼠肝臟Nrf-2mRNA的表達(dá)水平比較
            5.2 各組小鼠肝臟HO-1mRNA的表達(dá)水平比較
            5.3 各組小鼠肝臟Nrf-2蛋白的表達(dá)水平比較
            5.4 各組小鼠肝臟HO-1蛋白的表達(dá)水平比較
            5.5 各組小鼠甲狀腺組織中Bcl-2表達(dá)水平比較
            5.7 各組小鼠甲狀腺組織中Bax含量比較
            5.8 TRAb與MDA、SOD、CAT的相關(guān)性分析
            5.9 MDA、SOD、CAT與Bcl-2、Bax的相關(guān)性分析
            5.10 MDA、SOD、CAT與Nrf-2/HO-1通路的相關(guān)性分析
        討論
            1.TRAb與甲狀腺大小是影響復(fù)發(fā)的重要危險(xiǎn)因素
            2.氧化應(yīng)激參與Graves病的發(fā)病過程
            3.氧化應(yīng)激影響Graves病復(fù)發(fā)相關(guān)因素,參與疾病復(fù)發(fā)過程
                3.1 氧化應(yīng)激參與Graves病的自身免疫紊亂及炎癥反應(yīng)過程
                3.2 氧化應(yīng)激參與細(xì)胞凋亡的調(diào)節(jié),從而影響甲狀腺大小
            4.抗氧化治療有益于Graves病的預(yù)后
            5.Nrf-2及其調(diào)控的下游基因在機(jī)體抗氧化中發(fā)揮重要作用
        小結(jié)
特色與創(chuàng)新
結(jié)論
問題與展望
致謝
參考文獻(xiàn)
文獻(xiàn)綜述
    參考文獻(xiàn)
在校期間公開發(fā)表的學(xué)術(shù)論文



本文編號：3855682