糖尿病是21世紀(jì)全球最嚴(yán)重的健康問題之一,對人類危害巨大。目前臨床上應(yīng)用于糖尿病的藥物存在著副作用高、藥效弱等問題,臨床應(yīng)用受到限制。近年研究表明,腸道微環(huán)境的改變與糖尿病的發(fā)生密切相關(guān),對腸道微環(huán)境的調(diào)控是改善糖尿病的有效手段。廣泛存在于藥用植物、蔬菜、水果中的天然產(chǎn)物,具有安全性好、生物活性多樣的特點(diǎn)。黃酮和三萜類成分已報道具有降血糖生物活性,但降糖的機(jī)制研究并不充分,而且其通過改善腸道微環(huán)境干預(yù)糖尿病的作用也未見報道。針對以上問題,本論文從以下方面開展了研究:首先構(gòu)建了動物源α-糖苷酶抑制劑篩選體系,評價了十二種天然產(chǎn)物的抑制活性,并進(jìn)一步評價優(yōu)選抑制劑與阿卡波糖聯(lián)用的協(xié)同作用。結(jié)果表明中藥木蝴蝶的種子提取物(OISE)和三萜類化合物具有較強(qiáng)的抑制活性,OISE抑制大鼠α-葡萄糖苷酶的IC50值為43.42 ±0.73 μg/mL,齊墩果酸、科羅索酸和熊果酸抑制豬胰腺α-淀粉酶的IC50為31.2-94.]μM。將優(yōu)選天然產(chǎn)物與阿卡波糖聯(lián)用時,OISE與阿卡波糖聯(lián)用可協(xié)同抑制大鼠α-葡萄糖苷酶,協(xié)同指數(shù)(CI)為0.35-0.54。體內(nèi)實驗中,OISE與阿卡波糖聯(lián)用可協(xié)同降低正常...

【文章頁數(shù)】：151 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
主要縮略詞表
1 緒論
    1.1 糖尿病
        1.1.1 糖尿病的分型
        1.1.2 糖尿病的診斷標(biāo)準(zhǔn)
        1.1.3 現(xiàn)有的降糖藥物
    1.2 腸道內(nèi)碳水化合物的消化對糖尿病的影響
        1.2.1 糖類的消化
        1.2.2 α-淀粉酶
        1.2.3 α-葡萄糖苷酶
        1.2.4 臨床中常用的α-糖苷酶抑制劑類藥物
        1.2.5 天然產(chǎn)物中的α-糖苷酶抑制劑
        1.2.6 藥物聯(lián)用抑制α-糖苷酶
    1.3 腸道菌群與糖尿病
        1.3.1 腸道菌群概述
        1.3.2 腸道菌群與糖尿病
        1.3.3 糖尿病藥物對腸道菌群結(jié)構(gòu)的影響
        1.3.4 天然產(chǎn)物調(diào)控腸道菌群改善糖尿病
    1.4 木蝴蝶黃酮
        1.4.1 木蝴蝶
        1.4.2 木蝴蝶黃酮
        1.4.3 黃芩苷元
        1.4.4 木蝴蝶黃酮的體內(nèi)代謝
    1.5 本論文主要研究思路
2 與阿卡波糖協(xié)同抑制α-糖苷酶的天然產(chǎn)物的篩選及活性評價
    2.1 引言
    2.2 材料與方法
        2.2.1 實驗材料與儀器
        2.2.2 植物提取物的制備和α-糖苷酶抑制劑的篩選
        2.2.3 大鼠小腸α-葡萄糖苷酶的抑制實驗
        2.2.4 豬胰腺α-淀粉酶的抑制實驗
        2.2.5 酵母α-葡萄糖苷酶的抑制實驗
        2.2.6 協(xié)同抑制的評價方法
        2.2.7 1型糖尿病小鼠模型的建立
        2.2.8 動物實驗設(shè)計與口服糖耐量測試
        2.2.9 統(tǒng)計學(xué)分析
    2.3 結(jié)果與討論
        2.3.1 α-糖苷酶抑制劑的篩選
        2.3.2 木蝴蝶種子提取物與阿卡波糖聯(lián)用對α-糖苷酶的抑制作用
        2.3.3 協(xié)同抑制的酶動力學(xué)研究
        2.3.4 木蝴蝶種子提取物與阿卡波糖聯(lián)用對小鼠餐后血糖的影響
        2.3.5 三萜對α-糖苷酶的抑制作用
        2.3.6 三萜與阿卡波糖聯(lián)用對α-糖苷酶的抑制作用
        2.3.7 三萜與阿卡波糖協(xié)同抑制α-淀粉酶的動力學(xué)研究
        2.3.8 三萜單用或與阿卡波糖聯(lián)用對小鼠餐后血糖的影響
    2.4 本章小結(jié)
3 木蝴蝶黃酮與阿卡波糖聯(lián)用降低小鼠餐后血糖的機(jī)制
    3.1 引言
    3.2 材料與方法
        3.2.1 實驗材料與儀器
        3.2.2 大鼠小腸α-葡萄糖苷酶的分離純化
        3.2.3 UPLC-ESI-MS與 HPLC分析
        3.2.4 木蝴蝶種子提取物的粗分離和活性成分鑒定
        3.2.5 α-葡萄糖苷酶的抑制實驗
        3.2.6 分子對接
        3.2.7 黃芩苷元與阿卡波糖聯(lián)用對小鼠餐后血糖的影響
        3.2.8 統(tǒng)計學(xué)分析
    3.3 結(jié)果與討論
        3.3.1 大鼠小腸α-葡萄糖苷酶的分離純化
        3.3.2 木蝴蝶種子提取物的活性成分確認(rèn)
        3.3.3 黃酮抑制α-糖苷酶的構(gòu)效關(guān)系
        3.3.4 黃酮與阿卡波糖聯(lián)用對α-糖苷酶的抑制作用
        3.3.5 黃芩苷元與阿卡波糖對α-葡萄糖苷酶的協(xié)同抑制動力學(xué)
        3.3.6 黃酮與阿卡波糖協(xié)同抑制的分子對接研究
        3.3.7 黃芩苷元與阿卡波糖聯(lián)用對小鼠餐后血糖的影響
    3.4 本章小結(jié)
4 黃芩苷元的腸道代謝動力學(xué)
    4.1 引言
    4.2 材料與方法
        4.2.1 材料與儀器
        4.2.2 黃芩苷元的腸道代謝動力學(xué)
        4.2.3 黃芩苷元的糞便排出動力學(xué)
        4.2.4 小鼠肝、腸組織代謝酶S9組分的提取
        4.2.5 肝、腸組織對黃芩苷元的體外代謝
        4.2.6 腸道菌群對黃酮的體外代謝
        4.2.7 代謝產(chǎn)物的鑒定
        4.2.8 黃芩苷元及其代謝產(chǎn)物的定量
    4.3 結(jié)果與討論
        4.3.1 黃芩苷元的腸道代謝和糞便排出動力學(xué)
        4.3.2 黃芩苷元的腸道代謝產(chǎn)物鑒定
        4.3.3 黃芩苷元代謝產(chǎn)物的腸道代謝和糞便排出動力學(xué)
        4.3.4 黃芩苷元在肝腸組織的體外代謝
        4.3.5 黃芩苷元及其代謝產(chǎn)物的體外腸道菌群代謝
        4.3.6 黃芩苷元口服給藥的小鼠腸道代謝機(jī)制
    4.4 本章小結(jié)
5 黃芩苷元對糖尿病大鼠腸道菌群的調(diào)控作用
    5.1 引言
    5.2 材料與方法
        5.2.1 材料與儀器
        5.2.2 糖尿病模型的建立
        5.2.3 動物實驗設(shè)計
        5.2.4 口服葡萄糖耐受實驗
        5.2.5 理化指標(biāo)的測定
        5.2.6 蛋白Western blotting實驗
        5.2.7 糞便短鏈脂肪酸測定
        5.2.8 DNA提取和高通量測序
        5.2.9 生物信息學(xué)分析
        5.2.10 統(tǒng)計學(xué)分析
    5.3 結(jié)果與討論
        5.3.1 黃芩苷元對糖尿病大鼠的降糖作用
        5.3.2 黃芩苷元對糖尿病大鼠脂代謝的影響
        5.3.3 黃芩苷元對糖尿病大鼠內(nèi)毒素血癥和炎癥反應(yīng)的影響
        5.3.4 黃芩苷元對糖尿病大鼠短鏈脂肪酸含量和腸道屏障功能的影響
        5.3.5 黃芩苷元對糖尿病大鼠腸道菌群結(jié)構(gòu)的影響
        5.3.6 腸道菌群有益有害菌的相關(guān)性分析
        5.3.7 黃芩苷元通過調(diào)節(jié)腸道菌群改善糖尿病的機(jī)制
    5.4 本章小結(jié)
6 結(jié)論與展望
    6.1 結(jié)論
    6.2 創(chuàng)新點(diǎn)
    6.3 展望
參考文獻(xiàn)
附錄
作者簡介
攻讀博士學(xué)位期間科研項目及科研成果
致謝



本文編號：3840746