目的:采用多種酶水解苦蕎清蛋白以制備苦蕎抗氧化肽,并探討苦蕎抗氧化肽對ox-LDL誘導(dǎo)HUVEC氧化損傷的保護(hù)作用。方法:1.以4種常見蛋白酶(堿性蛋白酶、木瓜蛋白酶、胃蛋白酶和胰蛋白酶)進(jìn)行篩選,以水解度(DH)為指標(biāo),確定最佳的蛋白酶,并通過單因素試驗(yàn)和響應(yīng)面法對堿性蛋白酶對苦蕎清蛋白的水解工藝進(jìn)行優(yōu)化,確定最佳的水解工藝。2.采用超濾,離子交換色譜,葡聚糖凝膠色譜,RP-HPLC對苦蕎清蛋白水解液進(jìn)行分離純化,以羥自由基清除活性為指標(biāo),純化出抗氧化活性最佳的多肽,并采用N端測序和Q-Tof質(zhì)譜兩種方法對純化的多肽進(jìn)行氨基酸序列測定。最后通過測定多肽的羥自由基活性、DPPH清除活性、還原力和脂質(zhì)過氧化抑制活性來全面分析多肽的體外抗氧化活性。3.以不同濃度的ox-LDL跟HUVEC共同孵育24h,以篩選ox-LDL的造模濃度。實(shí)驗(yàn)分組:空白對照組、ox-LDL模型組、P3肽(低濃度組,高濃度組)、GSH陽性藥物對照組。以MTT法檢測細(xì)胞存活率;測定各組細(xì)胞培養(yǎng)液中丙二醛(MDA)含量和乳酸脫氫酶(LDH)活性;測定各組細(xì)胞中的活性氧(ROS)、超氧化物歧化酶(SOD)活性和一氧化氮(...

【文章頁數(shù)】：88 頁

【學(xué)位級別】：碩士

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流程圖
引言
第一部分 苦蕎清蛋白酶解工藝優(yōu)化
    1.材料與方法
    2.結(jié)果
    3.討論
    4.小結(jié)
第二部分 苦蕎清蛋白抗氧化肽的分離純化及鑒定
    1.材料與方法
    2.結(jié)果
    3.討論
    4.小結(jié)
第三部分 P3肽對ox-LDL致內(nèi)皮細(xì)胞HUVEC氧化損傷的保護(hù)作用研究
    1.材料與方法
    2.結(jié)果
    3.討論
    4.小結(jié)
全文總結(jié)
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
作者簡歷
致謝
學(xué)位論文數(shù)據(jù)集



本文編號：3821832