目的:采用多種酶水解苦蕎清蛋白以制備苦蕎抗氧化肽,并探討苦蕎抗氧化肽對ox-LDL誘導HUVEC氧化損傷的保護作用。方法:1.以4種常見蛋白酶(堿性蛋白酶、木瓜蛋白酶、胃蛋白酶和胰蛋白酶)進行篩選,以水解度(DH)為指標,確定最佳的蛋白酶,并通過單因素試驗和響應面法對堿性蛋白酶對苦蕎清蛋白的水解工藝進行優(yōu)化,確定最佳的水解工藝。2.采用超濾,離子交換色譜,葡聚糖凝膠色譜,RP-HPLC對苦蕎清蛋白水解液進行分離純化,以羥自由基清除活性為指標,純化出抗氧化活性最佳的多肽,并采用N端測序和Q-Tof質(zhì)譜兩種方法對純化的多肽進行氨基酸序列測定。最后通過測定多肽的羥自由基活性、DPPH清除活性、還原力和脂質(zhì)過氧化抑制活性來全面分析多肽的體外抗氧化活性。3.以不同濃度的ox-LDL跟HUVEC共同孵育24h,以篩選ox-LDL的造模濃度。實驗分組:空白對照組、ox-LDL模型組、P3肽(低濃度組,高濃度組)、GSH陽性藥物對照組。以MTT法檢測細胞存活率;測定各組細胞培養(yǎng)液中丙二醛(MDA)含量和乳酸脫氫酶(LDH)活性;測定各組細胞中的活性氧(ROS)、超氧化物歧化酶(SOD)活性和一氧化氮(...

【文章頁數(shù)】：88 頁

【學位級別】：碩士

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流程圖
引言
第一部分 苦蕎清蛋白酶解工藝優(yōu)化
    1.材料與方法
    2.結果
    3.討論
    4.小結
第二部分 苦蕎清蛋白抗氧化肽的分離純化及鑒定
    1.材料與方法
    2.結果
    3.討論
    4.小結
第三部分 P3肽對ox-LDL致內(nèi)皮細胞HUVEC氧化損傷的保護作用研究
    1.材料與方法
    2.結果
    3.討論
    4.小結
全文總結
參考文獻
綜述
    參考文獻
作者簡歷
致謝
學位論文數(shù)據(jù)集



本文編號：3821832