毛蕊異黃酮(calycosin)是一種黃酮類化合物,主要存在于黃芪的根中。目前報道的毛蕊異黃酮的藥理作用主要涉及抗菌及抑制病毒作用,能夠降血脂、降血糖、減少糖尿病并發(fā)癥等。毛蕊異黃酮的抗氧化活性也逐漸引起人們的關注研究。但是,目前還未有關于毛蕊異黃酮的抗衰老研究報道。目的:以秀麗隱桿線蟲(Caenorhabditiselegans,C.elegans)為生物模型,探討毛蕊異黃酮對其壽命的影響及其內在的分子機制。方法:1.壽命分析實驗:線蟲同期化后長至L4期,而后轉移至空白對照組和毛蕊異黃酮給藥組逐天記錄線蟲壽命,評價毛蕊異黃酮對線蟲壽命的影響并且篩選出給藥組中的最佳濃度。2.抗應激能力實驗:利用百草枯或給予熱刺激引發(fā)線蟲體內的過氧環(huán)境,觀察記錄線蟲的壽命變化,以此判斷毛蕊異黃酮的抗氧化性。3.線蟲體內活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)檢測:檢測毛蕊異黃酮對線蟲體內ROS的清除能力以進一步說明毛蕊異黃酮的抗氧化能力。4.DAF-16和SKN-1的亞細胞定位實驗:給藥2h后觀察記錄DAF-16::GFP及SKN-1::GFP轉基因線蟲中DAF-16的亞細胞定...

【文章頁數】：70 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第1章 緒論
    1.1 毛蕊異黃酮(calycosin)
    1.2 線蟲(Caenorkabditiselegans)
        1.2.1 自然史
        1.2.2 生命周期
        1.2.3 選擇線蟲作為模式生物的優(yōu)勢
        1.2.4 線蟲生命周期的調節(jié)
    1.3 DAF-16
        1.3.1 DAF-16的結構
        1.3.2 DAF-16/FOXO的上游信號通路
        1.3.3 DAF-16的活性調節(jié)
        1.3.4 DAF-16的下游基因
        1.3.5 UNC-43參與的CAMKII信號通路
    1.4 本論文的研究內容
第2章 秀麗隱桿線蟲的一般培養(yǎng)
    2.1 實驗材料、試劑和儀器
        2.1.1 線蟲、菌株
        2.1.2 實驗試劑
        2.1.3 實驗儀器
    2.2 培養(yǎng)基及所用緩沖液配方
        2.2.1 線蟲生長固體培養(yǎng)基(NematodeGrowthMedium,NGM).
        2.2.2 線蟲生長液體培養(yǎng)基(S-Medium)
        2.2.3 LB液體培養(yǎng)基
        2.2.4 LB固體培養(yǎng)基
        2.2.5 緩沖液
    2.3 秀麗隱桿線蟲的一般培養(yǎng)方法
        2.3.1 E.coliOP50的培養(yǎng)和接種
        2.3.2 線蟲的轉移/傳代方法
        2.3.3 線蟲的同期化
        2.3.4 線蟲的凍存與復蘇
        2.3.5 線蟲培養(yǎng)過程中的雜菌去除方法
    2.4 小結
第3章 毛蕊異黃酮對秀麗隱桿線蟲壽命的延長作用
    3.1 實驗材料、試劑和儀器
        3.1.1 線蟲、菌株
        3.1.2 實驗試劑
        3.1.3 實驗儀器
    3.2 實驗方法
        3.2.1 毛蕊異黃酮貯液的配制和保存
        3.2.2 E.coliOP50的滅活
        3.2.3 線蟲培養(yǎng)基(NGM)的配制
        3.2.4 E.coliOP50菌液的配制
        3.2.5 線蟲壽命實驗
        3.2.6 線蟲壓力應激實驗
        3.2.7 急性氧化應激實驗
        3.2.8 急性熱應激實驗
        3.2.9 線蟲體內活性氧簇(ROS)檢測
        3.2.10 線蟲生殖能力檢測
        3.2.11 線蟲咽泵實驗
        3.2.12 統(tǒng)計學方法
    3.3 實驗結果
        3.3.1 線蟲壽命實驗結果
        3.3.2 線蟲壓力應激實驗結果
        3.3.3 急性氧應激實驗結果
        3.3.4 急性熱應激實驗結果
        3.3.5 線蟲體內ROS檢測實驗結果
        3.3.6 線蟲限食途徑實驗結果
    3.4 小結
第4章 毛蕊異黃酮對線蟲延壽作用的分子機制研究
    4.1 實驗材料、試劑和儀器
        4.1.1 線蟲、菌株
        4.1.2 實驗試劑
        4.1.3 實驗儀器
    4.2 實驗方法
        4.2.1 daf-2(e1370),daf-16(mgDf50),age-1(hx546)突變株壽命實驗
        4.2.2 daf-16的基因表達
        4.2.3 DAF-16與SKN-1的亞細胞定位實驗
        4.2.4 實時定量RT-PCR實驗
        4.2.5 統(tǒng)計學方法
    4.3 實驗結果
        4.3.1 毛蕊異黃酮對胰島素信號通路的影響
        4.3.2 受毛蕊異黃酮調控的轉錄因子
        4.3.3 UNC-43在毛蕊異黃酮延長線蟲壽命中的作用
    4.4 小結
第5章 討論與展望
    5.1 討論
        5.1.1 討論
        5.1.2 結論
    5.2 展望
參考文獻
發(fā)表論文和科研情況說明
致謝



本文編號：3821280