毛蕊異黃酮(calycosin)是一種黃酮類化合物,主要存在于黃芪的根中。目前報(bào)道的毛蕊異黃酮的藥理作用主要涉及抗菌及抑制病毒作用,能夠降血脂、降血糖、減少糖尿病并發(fā)癥等。毛蕊異黃酮的抗氧化活性也逐漸引起人們的關(guān)注研究。但是,目前還未有關(guān)于毛蕊異黃酮的抗衰老研究報(bào)道。目的:以秀麗隱桿線蟲(Caenorhabditiselegans,C.elegans)為生物模型,探討毛蕊異黃酮對(duì)其壽命的影響及其內(nèi)在的分子機(jī)制。方法:1.壽命分析實(shí)驗(yàn):線蟲同期化后長(zhǎng)至L4期,而后轉(zhuǎn)移至空白對(duì)照組和毛蕊異黃酮給藥組逐天記錄線蟲壽命,評(píng)價(jià)毛蕊異黃酮對(duì)線蟲壽命的影響并且篩選出給藥組中的最佳濃度。2.抗應(yīng)激能力實(shí)驗(yàn):利用百草枯或給予熱刺激引發(fā)線蟲體內(nèi)的過氧環(huán)境,觀察記錄線蟲的壽命變化,以此判斷毛蕊異黃酮的抗氧化性。3.線蟲體內(nèi)活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)檢測(cè):檢測(cè)毛蕊異黃酮對(duì)線蟲體內(nèi)ROS的清除能力以進(jìn)一步說明毛蕊異黃酮的抗氧化能力。4.DAF-16和SKN-1的亞細(xì)胞定位實(shí)驗(yàn):給藥2h后觀察記錄DAF-16::GFP及SKN-1::GFP轉(zhuǎn)基因線蟲中DAF-16的亞細(xì)胞定...

【文章頁數(shù)】：70 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第1章 緒論
    1.1 毛蕊異黃酮(calycosin)
    1.2 線蟲(Caenorkabditiselegans)
        1.2.1 自然史
        1.2.2 生命周期
        1.2.3 選擇線蟲作為模式生物的優(yōu)勢(shì)
        1.2.4 線蟲生命周期的調(diào)節(jié)
    1.3 DAF-16
        1.3.1 DAF-16的結(jié)構(gòu)
        1.3.2 DAF-16/FOXO的上游信號(hào)通路
        1.3.3 DAF-16的活性調(diào)節(jié)
        1.3.4 DAF-16的下游基因
        1.3.5 UNC-43參與的CAMKII信號(hào)通路
    1.4 本論文的研究?jī)?nèi)容
第2章 秀麗隱桿線蟲的一般培養(yǎng)
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料、試劑和儀器
        2.1.1 線蟲、菌株
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        2.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器
    2.2 培養(yǎng)基及所用緩沖液配方
        2.2.1 線蟲生長(zhǎng)固體培養(yǎng)基(NematodeGrowthMedium,NGM).
        2.2.2 線蟲生長(zhǎng)液體培養(yǎng)基(S-Medium)
        2.2.3 LB液體培養(yǎng)基
        2.2.4 LB固體培養(yǎng)基
        2.2.5 緩沖液
    2.3 秀麗隱桿線蟲的一般培養(yǎng)方法
        2.3.1 E.coliOP50的培養(yǎng)和接種
        2.3.2 線蟲的轉(zhuǎn)移/傳代方法
        2.3.3 線蟲的同期化
        2.3.4 線蟲的凍存與復(fù)蘇
        2.3.5 線蟲培養(yǎng)過程中的雜菌去除方法
    2.4 小結(jié)
第3章 毛蕊異黃酮對(duì)秀麗隱桿線蟲壽命的延長(zhǎng)作用
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料、試劑和儀器
        3.1.1 線蟲、菌株
        3.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        3.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 毛蕊異黃酮貯液的配制和保存
        3.2.2 E.coliOP50的滅活
        3.2.3 線蟲培養(yǎng)基(NGM)的配制
        3.2.4 E.coliOP50菌液的配制
        3.2.5 線蟲壽命實(shí)驗(yàn)
        3.2.6 線蟲壓力應(yīng)激實(shí)驗(yàn)
        3.2.7 急性氧化應(yīng)激實(shí)驗(yàn)
        3.2.8 急性熱應(yīng)激實(shí)驗(yàn)
        3.2.9 線蟲體內(nèi)活性氧簇(ROS)檢測(cè)
        3.2.10 線蟲生殖能力檢測(cè)
        3.2.11 線蟲咽泵實(shí)驗(yàn)
        3.2.12 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
    3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.3.1 線蟲壽命實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.3.2 線蟲壓力應(yīng)激實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.3.3 急性氧應(yīng)激實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.3.4 急性熱應(yīng)激實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.3.5 線蟲體內(nèi)ROS檢測(cè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.3.6 線蟲限食途徑實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    3.4 小結(jié)
第4章 毛蕊異黃酮對(duì)線蟲延壽作用的分子機(jī)制研究
    4.1 實(shí)驗(yàn)材料、試劑和儀器
        4.1.1 線蟲、菌株
        4.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        4.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器
    4.2 實(shí)驗(yàn)方法
        4.2.1 daf-2(e1370),daf-16(mgDf50),age-1(hx546)突變株壽命實(shí)驗(yàn)
        4.2.2 daf-16的基因表達(dá)
        4.2.3 DAF-16與SKN-1的亞細(xì)胞定位實(shí)驗(yàn)
        4.2.4 實(shí)時(shí)定量RT-PCR實(shí)驗(yàn)
        4.2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
    4.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        4.3.1 毛蕊異黃酮對(duì)胰島素信號(hào)通路的影響
        4.3.2 受毛蕊異黃酮調(diào)控的轉(zhuǎn)錄因子
        4.3.3 UNC-43在毛蕊異黃酮延長(zhǎng)線蟲壽命中的作用
    4.4 小結(jié)
第5章 討論與展望
    5.1 討論
        5.1.1 討論
        5.1.2 結(jié)論
    5.2 展望
參考文獻(xiàn)
發(fā)表論文和科研情況說明
致謝



本文編號(hào)：3821280