目的:利用腺病毒過表達(dá)和沉默技術(shù)研究Wnt信號通路抑制因子Sost在大鼠骨形成中的作用,探索補(bǔ)腎健脾活血方對Sost,Wnt2,OPG和BMP2的影響。方法:1、實(shí)驗(yàn)動物:4月齡雌性SD大鼠28只。2、實(shí)驗(yàn)分組:分為A.空白對照組,B.空載腺病毒組,C.過表達(dá)Sost組,D.沉默Sost組,每組設(shè)置7只大鼠,共4組。3、給藥方式及劑量:將包裝好的大鼠腺病毒采用腹腔注射方法,注射量為病毒滴度(10¹⁰),200ul/只�？瞻讓φ战M(A組)不注射病毒;空載腺病毒組(B組)腹腔注射空載腺病毒。過表達(dá)Sost組(C組)腹腔注射過表達(dá)Sost腺病毒,沉默Sost組(D組)腹腔注射沉默Sost腺病毒。4、1個(gè)月后,C組和D組的1-4號大鼠給予補(bǔ)腎健脾方中藥灌胃,A組和B組的1-4號大鼠給予等量的生理鹽水灌胃。2個(gè)月后,處死各組大鼠,檢測大鼠股骨骨密度(BMD);(1)采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測腺病毒過表達(dá)或沉默Sost后大鼠組織中Wnt2、OPG、Sost、BMP-2的基因表達(dá)情況。(2)采用WB技術(shù)檢測通路蛋白Wnt2、OPG、Sost、BMP-2蛋白的表達(dá)。結(jié)果:1、腺病...

【文章頁數(shù)】：63 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
引言
第一章 文獻(xiàn)研究
    第一節(jié) OP的文獻(xiàn)研究
        一、OP定義及診斷標(biāo)準(zhǔn)
        二、OP的流行病學(xué)概述
        三、骨相關(guān)細(xì)胞通路概述
        四、OP的中醫(yī)認(rèn)識
        五、藥物治療OP概述
    第二節(jié) Sost、Wnt2、OPG和BMP-2的文獻(xiàn)研究
        一、Sost與骨代謝
        二、Sost在治療OP中的進(jìn)展
        三、Wnt2與骨質(zhì)疏松
        四、OPG與骨質(zhì)疏松
        五、BMP-2與骨質(zhì)疏松
    第三節(jié) 總結(jié)
第二章 基于Sost/Wnt通路研究補(bǔ)腎健脾活血方對大鼠骨形成的影響
    第一節(jié) 實(shí)驗(yàn)材料與方法
        一、實(shí)驗(yàn)動物
        二、實(shí)驗(yàn)試劑
        三、實(shí)驗(yàn)儀器
        四、適應(yīng)性飼養(yǎng)并篩選SD大鼠
        五、將SD大鼠分組并標(biāo)記
        六、構(gòu)建大鼠過表達(dá)和沉默Sost腺病毒
        七、沉默和過表達(dá)重組腺病毒載體轉(zhuǎn)染SD大鼠
        八、補(bǔ)腎健脾活血方的提取及灌胃
        九、取材
        十、測定骨密度
        十一、PCR檢測
        十二、WB檢測
        十三、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
    第二節(jié) 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        一、腺病毒含量定性分析
        二、各組大鼠股骨骨密度(BMD)變化
        三、補(bǔ)腎健脾活血方對大鼠Wnt2、OPG、BMP-2 mRNA的影響
        四、補(bǔ)腎健脾活血方對大鼠Wnt2、OPG、Sost、BMP-2蛋白的影響
第三章 討論與分析
結(jié)語
參考文獻(xiàn)
附錄
在校期間發(fā)表論文情況
    發(fā)表論文
    參與課題
致謝
附件



本文編號：3809998