發(fā)布時間：2023-04-11 21:56

　　目的:通過構(gòu)建高脂飲食誘導(dǎo)的ApoE^-/-小鼠AS模型及ox-LDL誘導(dǎo)的HUVECs損傷模型,觀察蘇木提取物對PI3K/Akt/mTOR信號通路及其介導(dǎo)的自噬的影響,進(jìn)一步探討蘇木提取物調(diào)控自噬的作用機(jī)制。方法:實(shí)驗(yàn)一:40只ApoE^-/-小鼠隨機(jī)分為空白組、模型組、蘇木提取物組和阿托伐他汀組,除空白組外,其余三組通過高脂飼料喂養(yǎng)8周的方法構(gòu)建AS小鼠模型。從模型復(fù)制的第1日起,各組給予相應(yīng)的藥物干預(yù),其中空白組和模型組給予等體積的羧甲基纖維素鈉混懸液(0.1ml/10g)灌胃治療,蘇木提取物組和阿托伐他汀組分別給予蘇木提取物混懸液(0.1ml/10g)和阿托伐他汀混懸液(0.1ml/10g)灌胃治療,均每日一次。觀察各組小鼠的一般狀態(tài)及體重變化;HE染色檢測小鼠主動脈病理形態(tài);油紅O染色檢測小鼠主動脈竇脂質(zhì)水平;TUNEL法檢測內(nèi)皮細(xì)胞的凋亡水平;ELISA法檢測血脂(TC、TG、LDL、HDL)和炎性因子(IL-6、IL-8)的含量;免疫組化法檢測動脈組織中PI3K、Akt、p-Akt、mTOR和p-mTOR蛋白的表達(dá)水平;Wester...

【文章頁數(shù)】：91 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
縮略語表
中文摘要
ABSTRACT
前言
文獻(xiàn)綜述
    1 自噬的研究進(jìn)展
        1.1 現(xiàn)代醫(yī)學(xué)對自噬的認(rèn)識及研究進(jìn)展
        1.2 PI3K/Akt/m TOR信 號通路與自噬的關(guān)系
        1.3 中醫(yī)學(xué)對自噬的認(rèn)識及研究進(jìn)展
    2 PI3K/Akt/m TOR信 號通路的研究進(jìn)展
        2.1 PI3K/Akt/m TOR信 號通路的概述
        2.2 PI3K/Akt/m TOR信 號通路與動脈粥樣硬化的關(guān)系
    3 蘇木的研究進(jìn)展
實(shí)驗(yàn)一 蘇木提取物對Apo E-/ -小 鼠主動脈自噬的影響
    材料與方法
        1 實(shí)驗(yàn)材料
            1.1 實(shí)驗(yàn)動物
            1.2 實(shí)驗(yàn)藥物
            1.3 實(shí)驗(yàn)試劑
            1.4 實(shí)驗(yàn)儀器
        2 實(shí)驗(yàn)方法
            2.1 實(shí)驗(yàn)動物分組
            2.2 動物模型的制備與給藥
            2.3 標(biāo)本取材
            2.4 HE染 色觀察主動脈病理形態(tài)
            2.5 油紅O染 色觀察主動脈竇脂質(zhì)水平
            2.6 TUNEL檢 測主動脈內(nèi)皮細(xì)胞凋亡水平
            2.7 ELISA檢 測TC、TG、LDL、HDL、IL-6 和IL-8 含量
            2.8 免疫組化法檢測PI3K、Akt、p-Akt、m TOR和p-m TOR蛋 白表達(dá)
            2.9 Western blot檢 測PI3K、Akt、p-Akt、m TOR、p-m TOR、Beclin-1、LC3I、LC3II和p62蛋 白表達(dá)
            2.10 Realtime PCR檢 測PI3K、Akt和m TOR m RNA表 達(dá)
            2.11 統(tǒng)計分析處理
    3 結(jié)果
        3.1 小鼠的一般狀態(tài)及體重的變化
        3.2 對小鼠主動脈病理形態(tài)和斑塊的影響
        3.3 對小鼠主動脈竇脂質(zhì)水平的影響
        3.4 對小鼠血脂及炎性因子的影響
        3.5 對小鼠主動脈內(nèi)皮細(xì)胞凋亡水平的影響
        3.6 對PI3K/Akt/m TOR信 號通路的影響
        3.7 對小鼠自噬蛋白的影響
實(shí)驗(yàn)二 蘇木提取物對人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞自噬的影響
    材料與方法
        1 實(shí)驗(yàn)材料
            1.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞
            1.2 實(shí)驗(yàn)藥物
            1.3 實(shí)驗(yàn)試劑
            1.4 實(shí)驗(yàn)儀器
        2 實(shí)驗(yàn)方法
            2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
            2.2 MTT法 檢測細(xì)胞活力
            2.3 流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡
            2.4 倒置相差顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)
            2.5 透射電子顯微鏡觀察細(xì)胞自噬流水平
            2.6 ELISA檢 測SOD、MDA、IL-6、IL-8、NO和e NOS含 量
            2.7 Western blot檢 測Bax、Caspase-3、Bcl-2、ICAM-1、VCAM-1、        Beclin-1、LC3I、LC3II、p62、PI3K、Akt、p-Akt、m TOR和p-m TOR蛋白 表達(dá)
            2.8 統(tǒng)計分析處理
    3 結(jié)果
        3.1 對細(xì)胞活力及凋亡的影響
        3.2 對凋亡蛋白的影響
        3.3 對細(xì)胞形態(tài)及自噬流的影響
        3.4 對細(xì)胞功能的影響
        3.5 對氧化應(yīng)激反應(yīng)的影響
        3.6 對炎性因子及黏附因子的影響
        3.7 對PI3K/Akt/m TOR信 號通路的影響
        3.8 對自噬蛋白的影響
討論
    1 關(guān)于動物模型的選擇
    2 對細(xì)胞活力及凋亡的影響
    3 對細(xì)胞形態(tài)及功能的影響
    4 對脂質(zhì)蓄積及斑塊形成的影響
    5 對炎性因子、黏附因子及氧化應(yīng)激反應(yīng)的影響
    6 對PI3K/Akt/m TOR信 號通路的影響
    7 對自噬及自噬流的影響
    8 創(chuàng)新點(diǎn)
    9 問題與展望
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
攻讀博士期間發(fā)表的論文
個人簡歷



本文編號：3789824