目的:觀察異丙腎上腺素誘導的H9c2心肌細胞肥大中自噬的發(fā)生情況,并研究探討青藤堿對Iso致心肌肥大的干預(yù)作用。方法:(1)MTT法檢測Sin對H9c2心肌細胞存活率的影響,確定其安全濃度范圍。(2)采用結(jié)晶紫染色,在倒置顯微鏡下觀察細胞形態(tài),用image-pro plus 6.0軟件檢測各組心肌細胞表面積的大小。(3)BCA法測定各組心肌細胞總蛋白的含量。(4)酶聯(lián)免疫吸附測定法(ELISA)檢測各組心肌細胞外液中IL-6的濃度。(5)用mCherry-GFP-LC3B雙熒光體系融合蛋白檢測自噬。(6)Western blot檢測ANP、LC3B(LC3Ⅰ、LC3Ⅱ)、Phospho-Akt(Thr308)蛋白的表達。結(jié)果:(1)Sin對H9c2心肌細胞的安全范圍濃度在300μmol/L之內(nèi)。(2)模型組中H9c2心肌細胞的表面積明顯高于正常組(***P<0.001),且細胞形態(tài)變得寬大,Sin給藥組的心肌細胞表面積與模型組比較有所減小(均###P<0.001)。(3)模型組的總蛋白含量相較于正常組顯著增加(*P<0.05),給藥組的總蛋白含量與模型組比較有所減少。...

【文章頁數(shù)】：60 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
致謝
摘要
ABSTRACT
縮略詞簡表
第一章 緒論
    1.1 心肌肥厚類型
    1.2 自噬與心肌肥厚的關(guān)系
    1.3 自噬的類型及基本過程
    1.4 心肌肥厚中自噬相關(guān)機制
        1.4.1 mTOR抑制途徑
        1.4.2 直接調(diào)控自噬途徑
        1.4.3 自噬—溶酶體途徑
    1.5 心肌肥厚的治療藥物
        1.5.1 血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑
        1.5.2 血管緊張素Ⅱ受體Ⅰ阻斷劑
        1.5.3 鈣拮抗劑
        1.5.4 利尿劑
        1.5.5 他汀類藥物
        1.5.6 β受體阻斷劑
        1.5.7 環(huán)加氧酶抑制劑
        1.5.8 中藥類藥物
    1.6 課題設(shè)計及研究意義
    1.7 本章小結(jié)
第二章 自噬在異丙腎上腺素誘導的H9c2心肌細胞肥大中的作用及青藤堿的干預(yù)影響
    2.1 引言
    2.2 實驗材料
        2.2.1 細胞株
        2.2.2 試劑材料
    2.3 實驗方法
        2.3.1 細胞培養(yǎng)
        2.3.2 不同濃度青藤堿對H9c2心肌細胞存活率的影響
        2.3.3 各組心肌細胞表面積的測定
        2.3.4 BCA法測各組細胞總蛋白含量
        2.3.5 ELISA 法檢測各組心肌細胞外液 IL-6 含量
        2.3.6 mCherry-GFP-LC3B 雙熒光體系融合蛋白檢測自噬
        2.3.7 Western blot 檢測 ANP、LC3B(LC3Ⅰ、LC3Ⅱ)、Phospho-Akt(Thr308)蛋白表達情況
        2.3.8 統(tǒng)計處理
    2.4 實驗結(jié)果
        2.4.1 不同濃度青藤堿對H9c2心肌細胞存活率的影響
        2.4.2 各組心肌細胞表面積的測定
        2.4.3 BCA法測各組細胞總蛋白含量
        2.4.4 ELISA 法檢測各組心肌細胞外液 IL-6 含量
        2.4.5 mCherry-GFP-LC3B 雙熒光體系融合蛋白檢測自噬
        2.4.6 Western blot 檢測 ANP、LC3B(LC3Ⅰ、LC3Ⅱ)、Phospho-Akt(Thr308)蛋白表達情況
    2.5 討論
        2.5.1 異丙腎上腺素在心肌肥厚發(fā)展中的作用
        2.5.2 自噬與心肌肥厚的關(guān)系
        2.5.3 青藤堿對心肌肥厚的防治作用
        2.5.4 青藤堿防治心肌肥厚作用中IL-6、Akt的變化關(guān)系
    2.6 本章小結(jié)
第三章 總結(jié)與展望
    3.1 總結(jié)
    3.2 創(chuàng)新點
    3.3 展望
參考文獻
碩士期間發(fā)表的論文和專利



本文編號：3789448