目的:隨著研究的不斷深入,腸道菌群對(duì)人類健康之間的聯(lián)系與影響已經(jīng)獲得了科學(xué)界的共識(shí),但是由于腸道菌群種類繁多,組成復(fù)雜,并且有個(gè)體化的差異,所以腸道菌群與人體互相的作用尚有很多未知需要解決。肉食中包含的成分硫酸軟骨素作為保健品一直被用于骨關(guān)節(jié)損傷的輔助治療,然而有研究稱硫酸軟骨素做培養(yǎng)基有滋養(yǎng)細(xì)菌的作用。根據(jù)硫酸軟骨素能促進(jìn)某些腸道細(xì)菌過度生長的文獻(xiàn)報(bào)道,本研究擬采用灌胃硫酸軟骨素的方法造成小鼠腸道菌群失調(diào)的模型誘導(dǎo)炎癥反應(yīng)甚至炎癥性疾病,證實(shí)其對(duì)身體的間接影響,并且采用抗菌抗炎藥物,對(duì)腸道菌群失調(diào)模型的治療作用做出分析評(píng)估,為找出腸道菌群造成的不利因素和解決問題的方案提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法:通過給小鼠灌胃適量硫酸軟骨素造成腸道失調(diào)模型,預(yù)期小鼠腸道硫酸酯酶分泌細(xì)菌與硫酸還原菌增多,硫化氫分泌過量導(dǎo)致腸道損傷。通過16SrRNA測(cè)序法分析小鼠腸道菌群組成、豐度和分類,結(jié)合測(cè)定炎癥指標(biāo)(LPS、TNFα、TLR4、CCL2、TNFR1、iNOS),阿茨海默癥指標(biāo)(Aβ、PS1),缺氧指標(biāo)(HIF-1α、VEGF、EPO、CYCS),腫瘤標(biāo)記物指標(biāo)(Cyclin D1、p21),腸道細(xì)菌酶的表...

【文章頁數(shù)】：66 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
引言
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 腸道微生物簡介
    1.2 MAMPs的促炎機(jī)制
    1.3 腸道屏障構(gòu)成及功能
    1.4 腸道細(xì)菌及硫酸軟骨素
        1.4.1 硫酸酯酶分泌菌與硫酸還原菌
        1.4.2 硫酸軟骨素簡介
        1.4.3 食物的其他影響
    1.5 肥胖與非酒精性脂肪肝
    1.6 阿茨海默癥
第二章 硫酸軟骨素誘導(dǎo)的小鼠腸道菌群失調(diào)模型
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物來源
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼料
        2.1.3 實(shí)驗(yàn)試劑和藥品
        2.1.4 實(shí)驗(yàn)儀器
    2.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)環(huán)境
    2.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組
    2.4 實(shí)驗(yàn)方法
        2.4.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物造模方法及樣本處理
        2.4.2 小鼠糞便細(xì)菌16S rRNA測(cè)序分析
    2.5 結(jié)果
        2.5.1 小鼠糞便中細(xì)菌相對(duì)豐度
        2.5.2 細(xì)菌物種豐度聚類分析
        2.5.3 特定物種分類樹
        2.5.4 SSB和SRB相對(duì)豐度
    2.6 討論
第三章 硫酸軟骨素誘發(fā)小鼠類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎與神經(jīng)炎癥AD樣病變
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        3.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑及藥品
        3.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 樣本處理
        3.2.2 酶聯(lián)免疫反應(yīng)(ELISA)的操作:
        3.2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.3.1 小鼠炎癥指標(biāo)的比較
        3.3.2 小鼠大腦炎癥指標(biāo)及AD病變指標(biāo)
    3.4 討論
第四章 硫酸軟骨素誘導(dǎo)不同器官的抗炎/促炎反應(yīng)
    4.1 實(shí)驗(yàn)材料
        4.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        4.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑及藥品
        4.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器
    4.2 實(shí)驗(yàn)方法
        4.2.1 樣本處理
        4.2.2 酶聯(lián)免疫反應(yīng)(ELISA)的操作:
        4.2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
    4.3 結(jié)果
    4.4 討論
第五章 硫酸軟骨素誘導(dǎo)的硫酸酯酶分泌和粘液蛋白降解
    5.1 實(shí)驗(yàn)材料
        5.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        5.1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼料
        5.1.3 實(shí)驗(yàn)試劑及藥品
        5.1.4 實(shí)驗(yàn)儀器
    5.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)環(huán)境
    5.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組
    5.4 實(shí)驗(yàn)方法
        5.4.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物造模方法及樣本處理
        5.4.2 Slpi免疫組化方法
            5.4.2.1 石蠟切片制作方法
            5.4.2.2 免疫組化方法
        5.4.3 RealTime PCR引物
        5.4.4 蛋白質(zhì)免疫印跡(Western blotting)方法
    5.5 結(jié)果
        5.5.1 SSB與SRB的sulfatase和ATP sulfurylase表達(dá)量
        5.5.2 Slpi免疫組化結(jié)果
        5.5.3 MUC1和MUC4的免疫印跡(WB)實(shí)驗(yàn)
    5.6 討論
第六章 硫酸軟骨素誘導(dǎo)小鼠腫瘤樣增生及腫瘤標(biāo)記物表達(dá)上升
    6.1 實(shí)驗(yàn)材料
        6.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        6.1.2 實(shí)驗(yàn)藥品與試劑
        6.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器
    6.2 實(shí)驗(yàn)方法
        6.2.1 ELISA實(shí)驗(yàn)方法
        6.2.2 Westernblotting實(shí)驗(yàn)方法
        6.2.3 RT-PCR引物
        6.2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    6.3 結(jié)果
        6.3.1 腫瘤與腫瘤標(biāo)記物
        6.3.2 炎癥指標(biāo)與細(xì)胞增生指標(biāo)
    6.4 討論
第七章 硫酸軟骨素誘導(dǎo)脂肪肝樣病變
    7.1 實(shí)驗(yàn)材料
        7.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        7.1.2 實(shí)驗(yàn)藥品與試劑
        7.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器
    7.2 實(shí)驗(yàn)方法
        7.2.1 油紅O染色方法
    7.3 結(jié)果
        7.3.1 小鼠肝臟油紅O染色
    7.4 討論
第八章 黃連素與抗生素對(duì)腸道菌群失調(diào)模型的療效探究
    8.1 實(shí)驗(yàn)材料
        8.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        8.1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼料
        8.1.3 實(shí)驗(yàn)試劑及藥品
        8.1.4 實(shí)驗(yàn)儀器
    8.2 實(shí)驗(yàn)方法
        8.2.1 小鼠造模與治療處理與分組
        8.2.2 Slpi免疫組化方法
        8.2.3 紅油O染色方法
        8.2.4 小鼠糞便細(xì)菌16S rRNA測(cè)序分析
    8.3 結(jié)果
        8.3.1 細(xì)菌物種豐度聚類分析
        8.3.2 肝臟油紅O染色
        8.3.3 小鼠結(jié)腸Slpi免疫組化
    8.4 討論
結(jié)語
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝
統(tǒng)計(jì)學(xué)審核證明



本文編號(hào)：3756158