神經(jīng)退行性疾�。∟eurodegenerative disease）,例如常見的帕金森�。≒arkinson’s disease,PD）、阿爾茲海默�。ˋlzheimer disease,AD）、肌萎縮側(cè)索硬化癥（amyotrophic lateral sclerosis,ALS）等,多是由于中樞神經(jīng)特定神經(jīng)元逐漸損傷正常功能或結(jié)構(gòu)所致^[1],隨著對該病發(fā)病機制的深入探索,打破了以往禁錮的氧化應(yīng)激、興奮性毒性等發(fā)病原因,認為神經(jīng)炎癥貫穿于神經(jīng)退行性疾病的發(fā)病進程中^[2]。其中一個重要的參與者是小膠質(zhì)細胞^[3]。當(dāng)受到脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）等刺激時,小膠質(zhì)細胞過度激活釋放各種炎癥介質(zhì),對神經(jīng)元造成損傷。酸棗仁皂苷A（Jujuboside A,Ju A）是養(yǎng)心安神常用中藥酸棗仁的有效活性成分,經(jīng)研究表明,具有對神經(jīng)元的保護和對老年癡呆小鼠的潛在治療作用^[4],但Ju A能否通過抑制神經(jīng)炎癥用于治療神經(jīng)退行性疾病目前尚未見相關(guān)報道。目的:研究Ju A對脂多糖誘發(fā)BV-2細胞... 

【文章頁數(shù)】：84 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
ABSTRACT
英文縮略詞(Abbreviation)
前言
第一部分 JuA對LPS誘發(fā)的BV-2細胞神經(jīng)炎癥的影響
    1 實驗材料和儀器
        1.1 細胞株
        1.2 藥物
        1.3 主要試劑
        1.4 主要試劑配制
        1.5 主要儀器
    2 實驗方法
        2.1 細胞復(fù)蘇
        2.2 細胞傳代和培養(yǎng)
        2.3 細胞凍存
        2.4 細胞計數(shù)
        2.5 細胞分組
        2.6 JuA對BV-2細胞存活率的影響(MTT法)
        2.7 Griess法檢測JuA對LPS誘導(dǎo)BV-2細胞NO釋放的影響
        2.8 Westernblot法檢測CD11b蛋白的表達
        2.9 激光共聚焦觀察JuA對LPS刺激BV-2細胞形態(tài)變化的影響
        2.10 RT-PCR檢測BV-2細胞iNOS、TNF-α、IL-1β、COX-2mRNA表達水平
        2.11 Westernblot法檢測iNOS、COX-2蛋白表達
        2.12 統(tǒng)計學(xué)方法
    3 結(jié)果
        3.1 JuA對BV-2細胞存活率的影響(MTT法)
        3.2 JuA對LPS誘導(dǎo)BV-2細胞NO水平的影響
        3.3 JuA對CD11b表達的調(diào)節(jié)作用
        3.4 JuA對LPS誘導(dǎo)BV-2細胞形態(tài)變化的影響
        3.5 JuA對LPS誘導(dǎo)BV-2細胞TNF-α、IL-1β、iNOS、COX-mRNA表達水平的影響
        3.6 JuA對LPS誘導(dǎo)BV-2細胞iNOS、COX-2蛋白表達的影響
    4 討論
        4.1 LPS與小膠質(zhì)細胞激活
        4.2 BV-2細胞炎癥發(fā)生的表現(xiàn)
    5 小結(jié)
第二部分 JuA抑制LPS誘發(fā)BV-2細胞神經(jīng)炎癥的作用機制.
    1 實驗材料和儀器
        1.1 細胞株
        1.2 藥物
        1.3 主要試劑
        1.4 主要試劑配制
        1.5 主要儀器
    2 實驗方法
        2.1 細胞復(fù)蘇、傳代、培養(yǎng)和凍存
        2.2 實驗分組及藥物處理
        2.3 細胞總蛋白提取
        2.4 細胞核蛋白和細胞質(zhì)蛋白分離
        2.5 蛋白含量的測定
        2.6 SDS-PAGE凝膠電泳
        2.7 免疫熒光染色
        2.8 統(tǒng)計學(xué)方法
    3 結(jié)果
        3.1 JuA抑制NF-κB蛋白的表達
        3.2 JuA激活Nrf2/ARE通路上調(diào)HO-1蛋白表達
        3.3 JuA對BV-2細胞PI3K/Akt調(diào)控Nrf2蛋白的影響
    4 討論
        4.1 NF-κB與神經(jīng)炎癥
        4.2 Nrf2與神經(jīng)炎癥
        4.3 Akt與Nrf2
    5 小結(jié)
第三部分 JuA對小膠質(zhì)細胞神經(jīng)炎癥引發(fā)的神經(jīng)元損傷的影響
    1 實驗材料和儀器
        1.1 細胞株
        1.2 藥物
        1.3 主要試劑
        1.4 主要試劑配制
        1.5 主要儀器
    2 實驗方法
        2.1 細胞復(fù)蘇、傳代、培養(yǎng)和凍存
        2.2 實驗分組
        2.3 JuA對活化的BV-2細胞條件培養(yǎng)液損傷HT-22細胞的影響(MTT法)
        2.4 熒光顯微鏡觀察DAPI染色
        2.5 流式細胞儀檢測細胞凋亡率(Annexin-V/PI雙染)
        2.6 Westernblot法檢測Cleaved-caspase-3、Bax、Bcl-2蛋白的表達
    3 結(jié)果
        3.1 JuA條件培養(yǎng)液對HT-22細胞存活率的影響
        3.2 JuA對L-CM導(dǎo)致的HT-22細胞凋亡的影響
    4 討論
        4.1 膠質(zhì)細胞與神經(jīng)元細胞體外共培養(yǎng)模型的建立
        4.2 凋亡的檢測
    5 小結(jié)
總結(jié)
    實驗線路圖
參考文獻
綜述
    參考文獻
附錄
    個人簡歷
    碩士期間發(fā)表的科研論文
致謝



本文編號：3713361