目的:本研究選取益氣養(yǎng)陰方及其拆方干預(yù)人急性髓系白血�。ˋML）KG-1a細(xì)胞中6種線粒體融合與分裂蛋白表達(dá),探討中醫(yī)扶正與祛邪療法通過線粒體途徑誘導(dǎo)白血病細(xì)胞凋亡的作用機(jī)制,為靶向治療急性白血病提供理論依據(jù),并為提高白血病的臨床療效提供新的思路和方法。方法:1.培養(yǎng)AML KG-1a細(xì)胞作為模型。2.CCK-8法檢測不同濃度、不同時間益氣養(yǎng)陰方對KG-1a細(xì)胞體外生長的抑制作用,由此確定益氣養(yǎng)陰方的IC₅₀值和最佳干預(yù)時間。3.Annexin V/PI雙染法流式細(xì)胞術(shù)（FCM）檢測細(xì)胞凋亡情況,計(jì)算細(xì)胞凋亡率;PI單染法FCM檢測細(xì)胞周期分布情況。4.透射電鏡觀察細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)與線粒體形態(tài)學(xué)變化。5.Western blot法檢測各組Mfn-1、Mfn-2、Opa-1、Drp-1、Fis-1、Mff的蛋白表達(dá)水平。6.RT-qPCR法檢測各組Mfn-1、Mfn-2、Opa-1、Drp-1、Fis-1、Mff的mRNA表達(dá)水平。結(jié)果:1.CCK-8法示益氣養(yǎng)陰方可抑制KG-1a細(xì)胞增殖（P<0.05）,并且具有良好的時間濃度依賴效應(yīng)。根據(jù)所獲IC_50... 

【文章頁數(shù)】：120 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
提要
abstract
中英文對照詞
引言
第一部分 實(shí)驗(yàn)研究
    實(shí)驗(yàn)一 細(xì)胞培養(yǎng),藥物制備與CCK-8法
        1.細(xì)胞培養(yǎng)
        2.藥物制備
        3.CCK-8法檢測細(xì)胞抑制率
    實(shí)驗(yàn)二 流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞周期與細(xì)胞凋亡率
        1.所需設(shè)備試劑：
        2.PI單染法FCM檢測細(xì)胞周期
        3.Annexin V/PI雙染法FCM檢測細(xì)胞凋亡
        4.實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    實(shí)驗(yàn)三 透射電鏡觀察細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)與線粒體形態(tài)學(xué)變化
        1.實(shí)驗(yàn)器材與設(shè)備
        2.主要實(shí)驗(yàn)試劑
        3.透射電鏡制片步驟
        4.觀察結(jié)果
    實(shí)驗(yàn)四 Western Blot檢測細(xì)胞線粒體融合與分裂蛋白的表達(dá)
        1.實(shí)驗(yàn)設(shè)備
        2.實(shí)驗(yàn)試劑
        3.實(shí)驗(yàn)步驟
        4.實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    實(shí)驗(yàn)五 RT-qPCR檢測細(xì)胞線粒體融合與分裂蛋白的m RNA表達(dá)
        1.主要實(shí)驗(yàn)設(shè)備及耗材
        2.RT-qPCR實(shí)驗(yàn)步驟
        3.實(shí)驗(yàn)結(jié)果
第二部分 討論
    一、中醫(yī)學(xué)對急性白血病的認(rèn)識
        1.歷代醫(yī)家對急性白血病的認(rèn)識
        2.現(xiàn)代中醫(yī)學(xué)對急性白血病的認(rèn)識
        3.AL的臨床辨證治療
        4.益氣養(yǎng)陰方簡介及組方分析
    二、益氣養(yǎng)陰方藥物的功能研究
        1.太子參
        2.黃芪
        3.白術(shù)
        4.茯苓
        5.甘草
        6.黃精
        7.女貞子
        8.墨旱蓮
        9.天冬
        10.麥冬
        11.生地黃
        12.半枝蓮
        13.白花蛇舌草
        14.蒲公英
        15.小薊
    三、線粒體融合與分裂
        1.概述
        2.線粒體融合與分裂蛋白的結(jié)構(gòu)和功能
        3.線粒體融合與分裂的功能
    四、線粒體調(diào)控細(xì)胞凋亡
        1.線粒體形態(tài)結(jié)構(gòu)改變與細(xì)胞凋亡
        2.線粒體融合/分裂與細(xì)胞凋亡
        3.線粒體融合與分裂蛋白對腫瘤發(fā)生和治療的作用
    五、結(jié)果探討
        1.益氣養(yǎng)陰方對KG-1a細(xì)胞生長的影響
        2.益氣養(yǎng)陰方對KG-1a細(xì)胞周期和凋亡率的影響
        3.益氣養(yǎng)陰方對KG-1a細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)和線粒體形態(tài)學(xué)的影響
        4.益氣養(yǎng)陰方對KG-1a細(xì)胞線粒體融合與分裂蛋白表達(dá)水平的影響
        5.益氣養(yǎng)陰方對KG-1a細(xì)胞線粒體融合與分裂蛋白m RNA表達(dá)水平的影響
結(jié)語
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
附錄
致謝
查新報(bào)告
發(fā)表論文



本文編號：3673023