巨噬細胞是人體先天性免疫應答中重要的成員,參與多種免疫過程。在炎癥反應中起著重要的調(diào)節(jié)作用,巨噬細胞適度活化釋放NO、白介素1β（IL-1β）、白介素8（IL-8）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、活性氧（ROS）等從而誘導細胞免疫以及殺滅病原微生物。然而,過度活化的巨噬細胞促炎反應不能及時終止,會損傷機體組織和細胞,危及身體健康。論文第一部分藥效學研究考察了三種蓮子心生物堿（蓮心堿、甲基蓮心堿、異蓮心堿）對脂多糖（LPS）誘導的小鼠巨噬細胞系RAW264.7過度活化的抑制作用。首先,培養(yǎng)小鼠巨噬細胞系RAW264.7,取生長狀態(tài)良好的巨噬細胞,分別采用劃痕實驗法和Transwell法考察三種蓮子心生物堿（10μM）與LPS（1μg/mL）聯(lián)合作用對巨噬細胞遷移能力的影響。實驗結果顯示,三種蓮子心生物堿可顯著抑制LPS激活的巨噬細胞遷移能力的增強。其次,應用酶聯(lián)免疫吸附分析實驗（ELISA）考察了三種蓮子心生物堿對LPS（1μg/mL）激活的巨噬細胞釋放炎癥因子IL-8的影響。實驗結果顯示,分別加入三種蓮子心生物堿（0.1、0.3、1、3和10μM）與LPS共同作用于巨噬細胞4 h后,... 

【文章頁數(shù)】：77 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
引言
    0.1 巨噬細胞(macrophage,Mac)
    0.2 巨噬細胞在相關病癥中的作用
        0.2.1 巨噬細胞與腫瘤
        0.2.2 巨噬細胞與動脈粥樣硬化
        0.2.3 巨噬細胞與高血壓
        0.2.4 巨噬細胞與糖尿病
        0.2.5 巨噬細胞在其它相關疾病中的作用
    0.3 巨噬細胞的過度活化與細胞內(nèi)游離鈣離子、鈣調(diào)蛋白的關系
    0.4 LPS刺激的巨噬細胞中與[Ca~(2+)]_i相關的NF-κB信號轉導通路
    0.5 蓮子心生物堿的化學結構及藥理作用
第1章 三種蓮子心生物堿抑制巨噬細胞過度活化的藥效學研究
    1.1 實驗材料
        1.1.1 實驗用細胞系
        1.1.2 實驗藥品與試劑
        1.1.3 實驗儀器
    1.2 實驗方法
        1.2.1 細胞培養(yǎng)和藥物配制
        1.2.2 劃痕實驗檢測巨噬細胞的遷移能力
        1.2.3 Transwell法檢測巨噬細胞的遷移能力
        1.2.4 ELISA法考察巨噬細胞內(nèi)IL-8釋放的變化
        1.2.5 統(tǒng)計學方法
    1.3 實驗結果
        1.3.1 三種蓮子心生物堿對LPS激活的巨噬細胞遷移能力的影響(劃痕實驗法)
        1.3.2 三種蓮子心生物堿對LPS激活的巨噬細胞遷移能力的影響(Transwell法)
        1.3.3 三種蓮子心生物堿對LPS激活的巨噬細胞IL-8釋放的影響
    1.4 分析與討論
    1.5 小結
第2章 三種蓮子心生物堿抑制巨噬細胞過度活化的機制研究
    2.1 實驗材料
        2.1.1 實驗用細胞系
        2.1.2 實驗藥品與試劑
        2.1.3 實驗儀器
    2.2 實驗方法
        2.2.1 Westernblot分析法
        2.2.2 巨噬細胞內(nèi)IκBα磷酸化和降解的檢測
        2.2.3 流式細胞儀檢測胞漿內(nèi)游離鈣離子變化
        2.2.4 熒光分光光度法檢測胞漿內(nèi)游離鈣離子變化
        2.2.5 計算機分子對接模擬考察三種蓮子心生物堿與鈣調(diào)蛋白的結合
        2.2.6 巨噬細胞內(nèi)鈣調(diào)蛋白(CAM)表達的檢測
        2.2.7 統(tǒng)計學方法
    2.3 實驗結果
        2.3.1 三種蓮子心生物堿對LPS活化的巨噬細胞內(nèi)IκBα磷酸化的影響
        2.3.2 三種蓮子心生物堿對LPS活化的巨噬細胞內(nèi)IκBα降解的影響
        2.3.3 三種蓮子心生物堿對LPS活化的巨噬細胞內(nèi)[Ca~(2+)]_i水平的影響(流式細胞儀法)
        2.3.4 三種蓮子心生物堿對LPS活化的巨噬細胞內(nèi)[Ca~(2+)]_i水平的影響(熒光分光光度法)
        2.3.5 三種蓮子心生物堿與鈣調(diào)蛋白的作用
        2.3.6 三種蓮子心生物堿對LPS活化的巨噬細胞內(nèi)鈣調(diào)蛋白表達的影響
    2.4 分析與討論
    2.5 小結
結論
致謝
參考文獻
攻讀學位期間發(fā)表的學術論文及參加科研情況


【參考文獻】：
期刊論文
[1]巨噬細胞移動抑制因子與自身免疫性疾病的研究進展[J]. 吳文昌,劉莎莎,張向君,周瑋,王加林.  醫(yī)學綜述. 2013(06)
[2]蓮心堿提取分離的研究進展[J]. 陳昌國,董蘭.  化學工業(yè)與工程技術. 2008(02)
[3]異蓮心堿對百草枯誘導的小鼠急性肺損傷及肺纖維化的保護作用(英文)[J]. 湯國想,趙立波,王曉敏,張韶輝,王嘉陵.  中國藥理學與毒理學雜志. 2007(06)
[4]雙芐基異喹啉類生物堿的心血管藥理作用(英文)[J]. 錢家慶.  Acta Pharmacologica Sinica. 2002(12)
[5]蓮心堿的研究概況和進展[J]. 羅順德,王輝.  中國藥房. 2001(10)

碩士論文
[1]蓮芯粉中甲基蓮心堿的酶法提取及抗氧化研究[D]. 任美.湖南農(nóng)業(yè)大學 2016



本文編號：3663443