發(fā)布時間：2022-07-19 12:48

　　巨噬細(xì)胞是人體先天性免疫應(yīng)答中重要的成員,參與多種免疫過程。在炎癥反應(yīng)中起著重要的調(diào)節(jié)作用,巨噬細(xì)胞適度活化釋放NO、白介素1β（IL-1β）、白介素8（IL-8）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、活性氧（ROS）等從而誘導(dǎo)細(xì)胞免疫以及殺滅病原微生物。然而,過度活化的巨噬細(xì)胞促炎反應(yīng)不能及時終止,會損傷機(jī)體組織和細(xì)胞,危及身體健康。論文第一部分藥效學(xué)研究考察了三種蓮子心生物堿（蓮心堿、甲基蓮心堿、異蓮心堿）對脂多糖（LPS）誘導(dǎo)的小鼠巨噬細(xì)胞系RAW264.7過度活化的抑制作用。首先,培養(yǎng)小鼠巨噬細(xì)胞系RAW264.7,取生長狀態(tài)良好的巨噬細(xì)胞,分別采用劃痕實(shí)驗(yàn)法和Transwell法考察三種蓮子心生物堿（10μM）與LPS（1μg/mL）聯(lián)合作用對巨噬細(xì)胞遷移能力的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,三種蓮子心生物堿可顯著抑制LPS激活的巨噬細(xì)胞遷移能力的增強(qiáng)。其次,應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附分析實(shí)驗(yàn)（ELISA）考察了三種蓮子心生物堿對LPS（1μg/mL）激活的巨噬細(xì)胞釋放炎癥因子IL-8的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,分別加入三種蓮子心生物堿（0.1、0.3、1、3和10μM）與LPS共同作用于巨噬細(xì)胞4 h后,... 

【文章頁數(shù)】：77 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
引言
    0.1 巨噬細(xì)胞(macrophage,Mac)
    0.2 巨噬細(xì)胞在相關(guān)病癥中的作用
        0.2.1 巨噬細(xì)胞與腫瘤
        0.2.2 巨噬細(xì)胞與動脈粥樣硬化
        0.2.3 巨噬細(xì)胞與高血壓
        0.2.4 巨噬細(xì)胞與糖尿病
        0.2.5 巨噬細(xì)胞在其它相關(guān)疾病中的作用
    0.3 巨噬細(xì)胞的過度活化與細(xì)胞內(nèi)游離鈣離子、鈣調(diào)蛋白的關(guān)系
    0.4 LPS刺激的巨噬細(xì)胞中與[Ca~(2+)]_i相關(guān)的NF-κB信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路
    0.5 蓮子心生物堿的化學(xué)結(jié)構(gòu)及藥理作用
第1章 三種蓮子心生物堿抑制巨噬細(xì)胞過度活化的藥效學(xué)研究
    1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.1.1 實(shí)驗(yàn)用細(xì)胞系
        1.1.2 實(shí)驗(yàn)藥品與試劑
        1.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器
    1.2 實(shí)驗(yàn)方法
        1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)和藥物配制
        1.2.2 劃痕實(shí)驗(yàn)檢測巨噬細(xì)胞的遷移能力
        1.2.3 Transwell法檢測巨噬細(xì)胞的遷移能力
        1.2.4 ELISA法考察巨噬細(xì)胞內(nèi)IL-8釋放的變化
        1.2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
    1.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        1.3.1 三種蓮子心生物堿對LPS激活的巨噬細(xì)胞遷移能力的影響(劃痕實(shí)驗(yàn)法)
        1.3.2 三種蓮子心生物堿對LPS激活的巨噬細(xì)胞遷移能力的影響(Transwell法)
        1.3.3 三種蓮子心生物堿對LPS激活的巨噬細(xì)胞IL-8釋放的影響
    1.4 分析與討論
    1.5 小結(jié)
第2章 三種蓮子心生物堿抑制巨噬細(xì)胞過度活化的機(jī)制研究
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)用細(xì)胞系
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)藥品與試劑
        2.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 Westernblot分析法
        2.2.2 巨噬細(xì)胞內(nèi)IκBα磷酸化和降解的檢測
        2.2.3 流式細(xì)胞儀檢測胞漿內(nèi)游離鈣離子變化
        2.2.4 熒光分光光度法檢測胞漿內(nèi)游離鈣離子變化
        2.2.5 計(jì)算機(jī)分子對接模擬考察三種蓮子心生物堿與鈣調(diào)蛋白的結(jié)合
        2.2.6 巨噬細(xì)胞內(nèi)鈣調(diào)蛋白(CAM)表達(dá)的檢測
        2.2.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
    2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.3.1 三種蓮子心生物堿對LPS活化的巨噬細(xì)胞內(nèi)IκBα磷酸化的影響
        2.3.2 三種蓮子心生物堿對LPS活化的巨噬細(xì)胞內(nèi)IκBα降解的影響
        2.3.3 三種蓮子心生物堿對LPS活化的巨噬細(xì)胞內(nèi)[Ca~(2+)]_i水平的影響(流式細(xì)胞儀法)
        2.3.4 三種蓮子心生物堿對LPS活化的巨噬細(xì)胞內(nèi)[Ca~(2+)]_i水平的影響(熒光分光光度法)
        2.3.5 三種蓮子心生物堿與鈣調(diào)蛋白的作用
        2.3.6 三種蓮子心生物堿對LPS活化的巨噬細(xì)胞內(nèi)鈣調(diào)蛋白表達(dá)的影響
    2.4 分析與討論
    2.5 小結(jié)
結(jié)論
致謝
參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文及參加科研情況


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]巨噬細(xì)胞移動抑制因子與自身免疫性疾病的研究進(jìn)展[J]. 吳文昌,劉莎莎,張向君,周瑋,王加林.  醫(yī)學(xué)綜述. 2013(06)
[2]蓮心堿提取分離的研究進(jìn)展[J]. 陳昌國,董蘭.  化學(xué)工業(yè)與工程技術(shù). 2008(02)
[3]異蓮心堿對百草枯誘導(dǎo)的小鼠急性肺損傷及肺纖維化的保護(hù)作用(英文)[J]. 湯國想,趙立波,王曉敏,張韶輝,王嘉陵.  中國藥理學(xué)與毒理學(xué)雜志. 2007(06)
[4]雙芐基異喹啉類生物堿的心血管藥理作用(英文)[J]. 錢家慶.  Acta Pharmacologica Sinica. 2002(12)
[5]蓮心堿的研究概況和進(jìn)展[J]. 羅順德,王輝.  中國藥房. 2001(10)

碩士論文
[1]蓮芯粉中甲基蓮心堿的酶法提取及抗氧化研究[D]. 任美.湖南農(nóng)業(yè)大學(xué) 2016



本文編號：3663443