盡管高效抗逆轉(zhuǎn)錄病毒療法（highly active antiretroviral therapy,HAART）能夠有效抑制艾滋病毒的復(fù)制,將病毒載量降低至不可檢測(cè)到的水平,但仍不能徹底清除病毒。人類免疫缺陷病毒（human immunodeficiency virus,HIV）在體內(nèi)的潛伏感染是無法治愈艾滋病的重要原因,“激活再殺傷”（shock and kill）治療策略是艾滋病治療的一個(gè)新方向。本課題采用HIV-1潛伏感染模型（J-Lat 11.1細(xì)胞）,通過流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)GFP陽(yáng)性細(xì)胞率來評(píng)價(jià)了哥王60%醇提物、芫花100%醇提物和黃芫花60%醇提物對(duì)HIV-1潛伏感染的再激活作用。結(jié)果表明了哥王60%醇提物的有效劑量范圍約為0.33μg/mL-208.30μg/mL;芫花100%醇提物的有效劑量范圍約為0.08μg/mL-52.63μg/m L;黃芫花60%醇提物的有效劑量范圍約為0.05μg/mL-166.70μg/m L。三種瑞香科植物醇提物的再激活作用均是從加藥后4 h開始發(fā)揮作用的。經(jīng)PKC抑制劑（G?6983或G?6850）或NF-κB抑制劑（PDTC或BAY 1... 

【文章頁(yè)數(shù)】：81 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
主要英文縮寫詞
第1章 緒論
    1.1 HIV-1簡(jiǎn)介
    1.2 HIV-1潛伏感染再激活
    1.3 HIV-1潛伏感染再激活機(jī)制
        1.3.1 染色質(zhì)結(jié)構(gòu)及表觀遺傳修飾
        1.3.2 細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子的調(diào)節(jié)
    1.4 研究?jī)?nèi)容及意義
    1.5 研究方案
第2章 實(shí)時(shí)檢測(cè)NF-κBp65、PKC核易位方法的建立
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 菌株、細(xì)胞株與質(zhì)粒
        2.1.2 試劑與耗材
        2.1.3 序列合成與測(cè)序
        2.1.4 主要儀器
        2.1.5 溶液配制
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        2.2.2 細(xì)胞RNA提取
        2.2.3 RT-PCR引物設(shè)計(jì)
        2.2.4 RT-PCR
        2.2.5 瓊脂糖凝膠電泳回收目的片段
        2.2.6 重組質(zhì)粒的連接
        2.2.7 重組質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化
        2.2.8 質(zhì)粒提取
        2.2.9 重組質(zhì)粒的雙酶切鑒定
        2.2.10 質(zhì)粒轉(zhuǎn)染
        2.2.11 細(xì)胞核DAPI染色
        2.2.12 活細(xì)胞成像觀察TNF-α對(duì)NF-κBp65、PKC核易位的影響
    2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.3.1 pEGFP-p65和pEGFP-PKC重組質(zhì)粒的構(gòu)建
        2.3.2 EGFP-p65和EGFP-PKC融合蛋白的表達(dá)
        2.3.3 TNF-α對(duì)EGFP-p65核易位的影響
        2.3.4 TNF-α對(duì)EGFP-PKC核易位的影響
    2.4 討論
    2.5 本章小結(jié)
第3章 三種瑞香科植物醇提物對(duì)HIV-1潛伏感染再激活的研究
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.1 細(xì)胞與試劑
        3.1.2 實(shí)驗(yàn)藥材
        3.1.3 主要儀器
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 天然植物提取物對(duì)J-Lat潛伏感染模型的再激活作用
        3.2.2 活細(xì)胞成像實(shí)時(shí)動(dòng)態(tài)觀察天然植物提取物對(duì)融合蛋白核易位的影響
        3.2.3 統(tǒng)計(jì)方法
    3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.3.1 了哥王60%醇提物對(duì)HIV-1潛伏感染的再激活作用
        3.3.2 芫花100%醇提物對(duì)HIV-1潛伏感染的再激活作用
        3.3.3 黃芫花60%醇提物對(duì)HIV-1潛伏感染的再激活作用
    3.4 討論
    3.5 本章小結(jié)
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
攻讀碩士學(xué)位期間所發(fā)表的學(xué)術(shù)論文
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]狼毒大戟提取物通過NF-κB通路激活潛伏HIV[J]. 潘曉彥,張明嬌,曾曉云,林健,李琳,李珉珉,趙偉.  南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào). 2015(11)
[2]HIV-1潛伏感染體外實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ脱芯窟M(jìn)展[J]. 康學(xué)軍,楊怡姝.  中國(guó)生物工程雜志. 2015(08)
[3]EGCG影響TNF-α誘導(dǎo)的NF-κB/p65入核及促凋亡效應(yīng)[J]. 王強(qiáng),陳曉艷,羅招陽(yáng),趙慧.  中國(guó)癌癥雜志. 2008(01)
[4]HIV-1的轉(zhuǎn)錄因子NF-κB及其抑制劑的研究進(jìn)展[J]. 于明艷,劉新泳.  藥學(xué)學(xué)報(bào). 2007(10)
[5]Nuclear Factor-κB:Activation and Regulation during Toll-Like Receptor Signaling[J]. Ruaidhrí J. Carmody.  Cellular ＆ Molecular Immunology. 2007(01)
[6]中草藥對(duì)Raji細(xì)胞EB病毒早期抗原的誘發(fā)作用[J]. 曾毅,鐘建明,莫永坤,苗學(xué)謙.  中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院學(xué)報(bào). 1984(02)



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