目的:京尼平苷是梔子的主要藥效成分,屬于環(huán)烯醚萜葡萄糖苷類化合物,具有抗糖尿病、抗炎、抗氧化、利膽保肝等作用,本課題旨在研究在離體大鼠胰島組織及胰島β細胞中京尼平苷對胰島素分泌的調(diào)控作用及其潛在機制,為京尼平苷作為糖尿病治療藥物提供一定的理論依據(jù)。方法:（1）選用雄性SD大鼠,處死后將其腹部在無菌狀態(tài)下剖開,充分暴露胰腺及周圍區(qū)域,將1mg/ml膠原酶P經(jīng)膽總管注入胰腺并剝離,37℃水浴消化11分鐘,中止消化,震蕩混勻,行梯度離心獲得胰島。取適量胰島,用dispaseⅡ消化5分鐘,得到單個胰島細胞。（2）在顯微鏡下挑取生長良好的胰島,用放射免疫法檢測京尼平苷及其它干預藥物對大鼠胰島素分泌及cAMP含量的影響。（3）采用膜片鉗技術(shù)進行各實驗組的鉀通道、鈣通道電流及動作電位的記錄。（4）應(yīng)用鈣熒光成像系統(tǒng)和熒光顯微鏡觀察京尼平苷對細胞內(nèi)鈣離子濃度的影響情況。結(jié)果:（1）在8.3mmol/L的葡萄糖條件下,不同濃度的京尼平苷（1、10、100μmol/L）劑量依賴性的促進胰島素分泌,在10μmol/L時達到最大促泌效應(yīng),低糖（2.8mmol/L）下則無作用。（2）隨葡萄糖濃度升高（2.8、8... 

【文章頁數(shù)】：61 頁

【學位級別】：碩士

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前言
第一部分 電壓依賴性鉀通道和鈣通道參與京尼平苷對大鼠胰島素分泌的調(diào)控
    1 材料與方法
        1.1 實驗動物
        1.2 主要藥品與試劑
        1.3 主要溶液的配制方法
        1.4 主要實驗儀器
        1.5 大鼠胰島組織的分離及培養(yǎng)
        1.6 大鼠胰島β細胞的分離和培養(yǎng)
        1.7 在組織水平觀察不同濃度的京尼平苷對大鼠胰島素分泌的影響
        1.8 在細胞水平探究京尼平苷調(diào)控胰島素分泌與電壓依賴性鉀（Kv）通道以及動作電位的關(guān)系
        1.9 通過胰島素分泌實驗在組織水平進一步探討京尼平苷調(diào)控胰島素分泌與Kv通道的關(guān)系
        1.10 通過膜片鉗實驗觀察京尼平苷對胰島β細胞鈣離子通道的影響
        1.11 數(shù)據(jù)處理及統(tǒng)計
    2 結(jié)果
        2.1 不同濃度京尼平苷對胰島素分泌的影響
        2.2 京尼平苷在不同葡萄糖濃度下對胰島素分泌的影響
        2.3 京尼平苷抑制了胰島β細胞的Kv通道
        2.4 京尼平苷可延長胰島β細胞的動作電位時程
        2.5 Kv通道在京尼平苷調(diào)控大鼠胰島素分泌中發(fā)揮重要作用
        2.6 京尼平苷促胰島素分泌作用與電壓門控性鈣通道相關(guān)
    3 討論
    4 結(jié)論
第二部分 京尼平苷通過GLP-1R/cAMP/PKA信號通路調(diào)控大鼠胰島素分泌
    1 方法與材料
        1.1 實驗動物
        1.2 實驗所需溶液的配制
        1.3 主要使用儀器
        1.4 大鼠胰島及胰島細胞的分離和培養(yǎng)
        1.5 通過胰島素胞外分泌實驗探討GLP-1R/cAMP及下游信號通路在京尼平苷調(diào)控胰島素分泌中發(fā)揮的作用
        1.6 通過進一步檢測胰島內(nèi)cAMP含量探究GLP-1R/AC信號途徑與京尼平苷促胰島素分泌作用的關(guān)系
        1.7 通過膜片鉗實驗探究GLP-1R在京尼平苷調(diào)控Kv通道中的作用
        1.8 通過膜片鉗實驗觀察PKA信號途徑在京尼平苷調(diào)控Kv通道中的作用
        1.9 通過鈣離子成像技術(shù)觀察京尼平苷及GLP-1R對胰島β細胞內(nèi)鈣離子濃度的影響
        1.10 統(tǒng)計學分析
    2 結(jié)果
        2.1 京尼平苷通過GLP-1R、cAMP及PKA信號通路發(fā)揮促胰島素分泌作用
        2.2 京尼平苷通過GLP-1R/AC信號通路使胰島內(nèi)cAMP含量增多
        2.3 GLP-1R在京尼平苷調(diào)控Kv通道中發(fā)揮重要作用
        2.4 京尼平苷抑制Kv通道的作用與PKA信號通路有關(guān)
        2.5 京尼平苷使胰島β細胞內(nèi)的鈣離子濃度升高
    3 討論
    4 結(jié)論
參考文獻
綜述
    參考文獻
致謝
個人簡歷


【參考文獻】：
期刊論文
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[10]清開靈有效組分對大鼠腦微血管內(nèi)皮細胞體外缺血再灌注損傷模型核轉(zhuǎn)錄因子-κB的影響[J]. 高永紅,邢雁偉,袁拯忠,朱陵群,李澎濤,王碩仁.  中西醫(yī)結(jié)合學報. 2009(02)

博士論文
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碩士論文
[1]腺苷酸環(huán)化酶Ⅲ（AC3）在非神經(jīng)細胞中定位的研究[D]. 郝江葉.河北大學 2014



本文編號：3654541