目的:以Caco-2細(xì)胞為模型,從細(xì)胞和分子水平考察薄荷醇促吸收作用與P-糖蛋白（P-gp）的關(guān)系,以及是否是通過NF-кB信號傳導(dǎo)通路來調(diào)控P-gp的表達(dá),為薄荷醇應(yīng)用于臨床,作為藥物腸道吸收促進(jìn)劑奠定基礎(chǔ)。方法:1.藥物對Caco-2細(xì)胞毒性范圍配制不同濃度梯度的薄荷醇、P-gp抑制劑維拉帕米、NF-кB信號通路抑制劑吡咯烷二硫代氨基甲酸鈉簡稱PDTC（Ammonium pyrrolidinedithiocarbamate）,利用Caco-2細(xì)胞進(jìn)行毒性實驗,酶標(biāo)儀測定OD值,確定Caco-2細(xì)胞存活率不小于90%的各給藥濃度,同時設(shè)定薄荷醇的高、中、低三個濃度組。2.藥物對Caco-2細(xì)胞的時效毒性用確定的薄荷醇、維拉帕米、PDTC對于Caco-2細(xì)胞的敏感藥物劑量進(jìn)行時效毒性研究。使各組藥物作用Caco-2細(xì)胞,并在5個時間點（1h、2h、12h、24h、48h）分別加入CCK-8,測定各組OD值,觀察給藥后不同時間點Caco-2細(xì)胞的存活率。3.薄荷醇對Caco-2細(xì)胞中MDR1基因及P-gp蛋白表達(dá)影響將低濃度薄荷醇組、中濃度薄荷醇組、高濃度薄荷醇組、維拉帕米組、PDTC組... 

【文章頁數(shù)】：88 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
序言
    1 研究背景
        1.1 薄荷醇的促透作用研究
        1.2 Caco-2 細(xì)胞中P-gp的研究
        1.3 P-gp相關(guān)信號通路的研究
    2 研究的創(chuàng)新點
    3 設(shè)計思想和研究方案
        3.1 設(shè)計思想
        3.2 研究方案
    4 研究意義
第一章 藥物對Caco-2 細(xì)胞毒性范圍研究
    1 實驗材料
        1.1 主要儀器設(shè)備
        1.2 試劑
        1.3 實驗細(xì)胞
    2 實驗方法
        2.1 藥物與試劑配制
        2.2 Caco-2 細(xì)胞的培養(yǎng)
        2.3 Caco-2 細(xì)胞模型的建立
        2.4 采用CCK-8 法測定藥物對Caco-2 細(xì)胞毒性范圍
    3 結(jié)果
    4 討論
第二章 藥物對Caco-2 細(xì)胞的時效毒性研究
    1 實驗材料
    2 實驗方法
        2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        2.2 Caco-2 細(xì)胞分組給藥
    3 結(jié)果
    4 討論
第三章 薄荷醇對Caco-2 細(xì)胞中MDR1基因及P-gp蛋白表達(dá)的影響
    第一節(jié) 薄荷醇對MDR1表達(dá)的影響
        1 實驗材料
            1.1 主要儀器設(shè)備
            1.2 主要試劑
        2 實驗方法
            2.1 藥物與試劑配制
            2.2 細(xì)胞培養(yǎng)
            2.3 Caco-2 細(xì)胞總RNA的提取
            2.4 逆轉(zhuǎn)錄實驗
            2.5 熒光定量PCR反應(yīng)
        3 統(tǒng)計學(xué)處理
        4 實驗結(jié)果
            4.1 P-gp及內(nèi)參引物檢測
            4.2 不同時間點薄荷醇對P-gp MDR1表達(dá)的影響
        5 討論
    第二節(jié) 薄荷醇對P-糖蛋白表達(dá)的影響
        1 實驗材料
            1.1 主要儀器設(shè)備
            1.2 主要試劑
        2 實驗方法
            2.1 藥物試劑配制
            2.2 細(xì)胞的培養(yǎng)給藥
            2.3 細(xì)胞總蛋白提取
            2.4 BCA蛋白定量
            2.5 目的蛋白western blot正式實驗
        3 統(tǒng)計學(xué)處理
        4 實驗結(jié)果
            4.1 不同時間點薄荷醇對P-gp蛋白表達(dá)影響的結(jié)果
        5 討論
第四章 薄荷醇對Caco-2 細(xì)胞NF-kB信號通路的影響
    1 實驗材料
        1.1 主要儀器設(shè)備
        1.2 主要試劑
    2 實驗方法
        2.1 藥物試劑配制
        2.2 細(xì)胞培養(yǎng)
        2.3 Caco-2 細(xì)胞總RNA的提取
        2.4 熒光定量PCR實驗
        2.5 細(xì)胞總蛋白提取
        2.6 細(xì)胞質(zhì)細(xì)胞核蛋白的分離提取
        2.7 BCA蛋白定量與Western blot
    3 統(tǒng)計學(xué)處理
    4 實驗結(jié)果
        4.1 IkBa及GAPDH引物檢測
        4.2 不同時間點薄荷醇對Ik Ba mRNA表達(dá)影響結(jié)果
        4.3 不同時間點薄荷醇對IкBa蛋白表達(dá)影響結(jié)果
        4.4 不同濃度薄荷醇在不同時間點對NF-kB p65核/漿蛋白表達(dá)水平的影響
    5 討論
第五章 總結(jié)
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
致謝
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的論文
中英文縮略詞表


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[6]Absorption characteristics of the total alkaloids from Mahonia bealei in an in situ single-pass intestinal perfusion assay[J]. SUN Yu-He,HE Xin,YANG Xiao-Lin,DONG Cui-Lan,ZHANG Chun-Feng,SONG Zi-Jing,LU Ming-Xing,YANG Zhong-Lin,LI Ping.  Chinese Journal of Natural Medicines. 2014(07)
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[10]丁香苦苷大鼠在體腸吸收動力學(xué)研究[J]. 曹穎,李永吉,呂邵娃,王艷宏.  中國中藥雜志. 2012(10)

博士論文
[1]原花青素通過抑制P-糖蛋白功能與表達(dá)從而逆轉(zhuǎn)腫瘤多藥耐藥作用的機(jī)制研究[D]. 趙博欣.南方醫(yī)科大學(xué) 2014

碩士論文
[1]薄荷醇通過P糖蛋白對丹參素腸吸收影響的研究[D]. 惲昊.廣東藥科大學(xué) 2016



本文編號：3649121