肺癌是世界上最常見的癌癥,為一種異質(zhì)性、復雜性和挑戰(zhàn)性的疾病,而且它的新發(fā)病例逐年上升。天然產(chǎn)物作為新藥研發(fā)的重要來源之一,這就促使我們在天然產(chǎn)物中尋找效果更好或有新靶點的抗腫瘤化合物。薯蕷皂苷元是從薯蕷屬植物的根莖中提取出來的一種植物甾體皂苷,是合成甾體類激素的重要原料�，F(xiàn)代藥理學研究證明,薯蕷皂苷元具有抗腫瘤、抗炎、降血脂和免疫調(diào)節(jié)等功能,并且毒副作用較低,應用廣泛。本課題組致力于薯蕷皂苷元的結(jié)構(gòu)修飾和活性篩選,發(fā)現(xiàn)經(jīng)過結(jié)構(gòu)修飾的薯蕷皂苷元衍生物具有很強的抗腫瘤活性。在本論文中,我們研究了化合物7在人非小細胞肺癌A549細胞中誘導細胞死亡的方式和機制。MTT法對一系列薯蕷皂苷元衍生物進行抗腫瘤活性篩選,篩選出最有潛力的化合物7進行后續(xù)機制研究。觀察藥物對細胞形態(tài)影響時,發(fā)現(xiàn)化合物可以誘導腫瘤細胞產(chǎn)生明顯的空泡,空泡不斷增多,相互融合,最終細胞膜破裂,細胞死亡。用PI染色流式細胞儀檢測發(fā)現(xiàn),化合物7導致A549細胞阻滯在G0/G1期。Annexin V/PI雙染并用流式細胞儀測定細胞的凋亡率,Western blot測定PARP蛋白,廣譜的凋亡抑制劑（Z-VAD-FMK）測定細胞死亡... 

【文章來源】：山東大學山東省211工程院校985工程院校教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：75 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
ABSTRACT
縮略語詞匯表
第一章 前言
    1.1 巨泡性死亡
    1.2 旁凋亡
    1.3 自噬
    1.4 脹亡
    1.5 四種出泡性死亡機制的異同
第二章 薯蕷皂苷元衍生物誘導肺癌細胞出泡性死亡的機制研究
    2.1 引言
    2.2 實驗材料
        2.2.1 化合物來源
        2.2.2 細胞株來源及實驗動物
        2.2.3 試劑
        2.2.4 主要儀器
        2.2.5 常用試劑配制
    2.3 實驗方法
        2.3.1 細胞復蘇、傳代和凍存
        2.3.2 MTT法檢測化合物的細胞毒性
        2.3.3 流式細胞儀檢測細胞周期
        2.3.4 Western blotting
        2.3.5 流式細胞儀檢測細胞凋亡
        2.3.6 免疫熒光
        2.3.7 體內(nèi)移植瘤抑制實驗
    2.4 結(jié)果與分析
        2.4.1 抗腫瘤活性篩選
        2.4.2 化合物7誘導多株腫瘤細胞產(chǎn)生空泡化現(xiàn)象
        2.4.3 化合物7誘導非凋亡性細胞死亡
        2.4.4 化合物7誘導細胞周期阻滯
        2.4.5 化合物7誘導非旁凋亡性細胞死亡
        2.4.6 化合物7誘導非自噬性細胞死亡
        2.4.7 化合物7誘導巨泡性死亡
        2.4.8 化合物7體內(nèi)抗腫瘤活性
    2.5 討論
第三章 片葉苔素D衍生物的抗腫瘤活性篩選和機制研究
    3.1 前言
    3.2 實驗材料
        3.2.1 化合物來源
        3.2.2 細胞株來源
        3.2.3 試劑
        3.2.4 儀器
    3.3 實驗方法
        3.3.1 MTT法檢測化合物的細胞毒性
        3.3.2 DAPI染色
        3.3.3 流式細胞儀檢測細胞凋亡
        3.3.4 溶酶體熒光探針染色和吖啶橙染色
        3.3.5 xCELLigence系統(tǒng)實時監(jiān)測
    3.4 實驗結(jié)果
        3.4.1 抗腫瘤活性篩選
        3.4.2 片葉苔素D衍生物誘導溶酶體膜滲透(LMP)
        3.4.3 片葉苔素D衍生物誘導A549細胞凋亡和壞死
    3.5 討論
參考文獻
致謝
攻讀碩士學位期間發(fā)表的論文
學位論文評閱及答辯情況表



本文編號：3633171