第一部分HSV-2感染VK2細(xì)胞不同時間點Toll樣受體信號通路的變化【目的】為建立良好的體外HSV-2感染VK2/E6E7細(xì)胞的模型以利后續(xù)實驗,需探索出一種簡便穩(wěn)定快速,可擴增出大量滿足毒力需求的HSV-2的方法。并在此基礎(chǔ)上研究HSV-2感染VK2/E6E7模型不同時間點TRLs信號通路各關(guān)鍵蛋白分子及終末免疫因子的變化,為進(jìn)一步探討中藥復(fù)方潔澤1號基于天然免疫TRLs信號通路抗HSV-2的作用機制奠定基礎(chǔ)�！痉椒ā渴紫炔捎靡訴ero細(xì)胞為宿主常規(guī)培養(yǎng)法、以VK2/E6E7細(xì)胞為宿主連續(xù)復(fù)壯法和以Vero細(xì)胞為宿主濃縮擴增體系法三種方法來擴增病毒,以Reed-Muench法測定每種方法所擴增HSV-2的TCID50和以MTT法測定每種方法所擴增HSV-2感染VK2/E6E7細(xì)胞的存活率,來評價其是否達(dá)到建模成功的標(biāo)準(zhǔn)、毒力高低、穩(wěn)定程度和擴增效率。分別在病毒感染細(xì)胞的0、2、4、6、12、18和24小時,采用MTT法測定細(xì)胞存活率,流式凋亡法檢測細(xì)胞凋亡率,Western Blot法檢測TLR2、TLR3、TLR4、TLR7、TLR9、g D、HVEM、My D88、TRIF、I... 

【文章來源】：華中科技大學(xué)湖北省211工程院校985工程院校教育部直屬院校

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【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

HSV-2在Vero細(xì)胞中擴增時的細(xì)胞形態(tài)和收獲時機（倒置顯微鏡100×）

圖 2 HSV-2 在 VK2/E6E7 細(xì)胞中擴增時的細(xì)胞形態(tài)和收獲時機（倒置顯微鏡 100×）（圖左為鋪滿孔底時的正常 VK2 細(xì)胞，圖右為達(dá)到收獲標(biāo)準(zhǔn)時的 VK2 細(xì)胞）從圖 2 可觀察到，正常的 VK2/E6E7 細(xì)胞像鋪路石樣排列，形態(tài)呈梭形，核仁明顯，核膜及胞膜完整，有少量呈球形的凋亡細(xì)胞，當(dāng) VK2/E6E7 細(xì)胞感染 HSV-2 且達(dá)到收獲標(biāo)準(zhǔn)時，整個視野內(nèi)的細(xì)胞全變球形或皺縮，核仁消失，核膜破碎，大部分細(xì)胞呈腫脹的空泡狀，折光性增強。3.以 Vero 為宿主常規(guī)培養(yǎng)的 HSV-2 病毒滴度及感染 VK2/E6E72 細(xì)胞存活率3.1 以 Vero 為宿主常規(guī)法培養(yǎng)的 HSV-2 病毒滴度測定當(dāng)各不同稀釋倍數(shù)的病毒組中細(xì)胞的 CPE 現(xiàn)象穩(wěn)定后結(jié)果匯總?cè)缦拢罕?1 以 Vero 常規(guī)培養(yǎng)的 HSV-2 病毒 TCID50 測定結(jié)果病毒稀釋倍數(shù) CPE 孔 無 CPE 孔 累積 CPE 孔 累積無 CPE 孔 CPE 孔比例10-16 0 40 0 40/4010-26 0 34 0 34/34-3

華 中 科 技 大 學(xué) 博 士 學(xué) 位 論 文距離比=（5/9-1/2）/(5/9-2/10)=0.16lgTCID50=0.16×（-1）＋（-7）=-7.16因此，其 TCID50=10-7.16，即 100ul 病毒野種含有 107.16個 TCID50。3.2 以 Vero 為宿主常規(guī)法培養(yǎng)的 HSV-2 病毒感染 VK2/E6E7 細(xì)胞形態(tài)學(xué)顯微鏡下觀察以 Vero 常規(guī)培養(yǎng)的 HSV-2 稀釋 5 倍、10 倍、20 倍、100 倍感染 VK2/E6E7 細(xì)胞的細(xì)胞形態(tài)及數(shù)量，如下圖：

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號：3625424