目的:研究黃連治療2型糖尿病的效應(yīng)物質(zhì)群,探討其多成分多靶點(diǎn)的分子機(jī)制。方法:依據(jù)本課題前期蛋白質(zhì)組學(xué)實(shí)驗(yàn)篩選出的血漿差異蛋白,利用生物信息學(xué)分析技術(shù)與多個(gè)數(shù)據(jù)庫及文獻(xiàn)篩選,采用反向分子對(duì)接技術(shù),探尋黃連治療2型糖尿病的有效成分群;同時(shí)運(yùn)用分子生物學(xué)技術(shù)（PCR及Western Blot）從細(xì)胞層面對(duì)效應(yīng)成分群進(jìn)行作用機(jī)制研究。結(jié)果:（1）選定從前期蛋白質(zhì)組學(xué)實(shí)驗(yàn)研究出的黃連治療2型糖尿病密切相關(guān)靶點(diǎn)蛋白65個(gè);（2）確定與黃連中化學(xué)成分親和力較高的14個(gè)蛋白質(zhì)（Pla2g7、G6PD、PSMA6、C4、C2、APOC3、APOC1、PRDX2、PKM2、APOE、GPX3、IGF-1、IGFBP4、IGFBP6）;（3）確定黃連治療2型糖尿病的有效成分可能有:Berberine、Coptisine、Epiberberine、Palmatine、Jatrorrhizine等5種化學(xué)成分。（4）通過分子生物學(xué)技術(shù)確定黃連5種效應(yīng)成分對(duì)親和力較高的14個(gè)靶標(biāo)中的10個(gè)蛋白（G6PD、PSMA6、PRDX2、PKM2、GPX3、IGF-1、IGFBP4、IGFBP6、APOC1、APOE）具... 

【文章來源】：華中科技大學(xué)湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：95 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

黃連5種成分與磷脂酶A2(Pla2g7)的對(duì)接模式圖

成疏水作用，由于巴馬汀的共軛結(jié)構(gòu)，還與G6PDA鏈的Phe253產(chǎn)生π-π堆積作用；黃連堿與表小檗堿與G6PD無相互作用。圖2.黃連 3 種成分與G6PD的對(duì)接模式圖。A：在3D示意圖中，黃連成分以綠色顯示，其余顏色表示靶蛋白；B：在平面示意圖中，綠色線條表示疏水作用，黑色虛線代表氫鍵。1.4.3.3 黃連5種成分與PSMA6的對(duì)接模式如圖3所示，黃連5種成分的羥基是形成氫鍵的作用位點(diǎn)，這些氫鍵是穩(wěn)定效應(yīng)物質(zhì)與PSMA6活性位點(diǎn)相互作用的關(guān)鍵因素，效應(yīng)物質(zhì)與PSMA6之間另一個(gè)穩(wěn)定結(jié)合的作用力為疏水作用。黃連堿與PSMA6 I鏈活性位點(diǎn)上的殘基Ala49、Thr48形成疏水作用;表小檗堿與PSMA6 I鏈活性位點(diǎn)上的殘基Thr21、Ala49、Ala20、Thr48形成疏水作用；藥根堿與PSMA6無疏水作用建；巴馬汀與PSMA6 I鏈活性位點(diǎn)上的殘基Ala49、Ala20、Thr48形成疏水作用；這些作用力使得效應(yīng)物質(zhì)能夠與活性位點(diǎn)區(qū)域牢固的結(jié)合。黃連堿與表小檗堿與PSMA6無相互作用。

華 中 科 技 大 學(xué) 碩 士 學(xué) 位 論 文33圖3. 黃連5種成分與PSMA6的對(duì)接模式圖。A：在3D示意圖中，效應(yīng)物質(zhì)以綠色顯示，其余顏色表示靶蛋白；B：在平面示意圖中，綠色線條表示疏水作用，黑色虛線代表氫鍵。小檗堿與PSMA6無作用鍵。1.4.3.4 黃連5種成分與PKM2的對(duì)接模式如圖4所示，五種效應(yīng)物質(zhì)的羥基是形成氫鍵的作用位點(diǎn)，這些氫鍵是穩(wěn)定效應(yīng)物質(zhì)與PKM2活性位點(diǎn)相互作用的關(guān)鍵因素，效應(yīng)物質(zhì)與PKM2之間另一個(gè)穩(wěn)定結(jié)合的作用力為疏水作用。如圖所示，小檗堿與PKM2A鏈活性位點(diǎn)上的殘基Leu394形成疏水作用，表小檗堿與PKM2A鏈活性位點(diǎn)上的殘基Phe26、Leu33、Leu353形成疏水作用;巴馬汀與PKM2 A鏈活性位點(diǎn)上的殘基Thr48、Ala49、Ala20形成疏水作用；黃連堿與藥根堿與PKM2鏈活性位點(diǎn)上的殘基未形成疏水作用；這些作用力使得效應(yīng)物質(zhì)能夠牢固的結(jié)合在活性位點(diǎn)區(qū)域。

【參考文獻(xiàn)】：
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