目的:探討腎復(fù)康含藥血清對轉(zhuǎn)化生長因子-β1（TGF-β1）誘導(dǎo)人腎小管上皮細(xì)胞株HK-2間質(zhì)轉(zhuǎn)化的影響及其分子機制。方法:以HK-2細(xì)胞作為研究對象,常規(guī)培養(yǎng)后將細(xì)胞進(jìn)行如下分組及刺激處理:空白對照組、模型對照組（10 ng/ml TGF-β1刺激）、32 g/kg尿毒清30%含藥血清組（30%尿毒清含藥血清+TGF-β1刺激）、18.32 g/kg腎復(fù)康10%、30%含藥血清組（10%或30%腎復(fù)康含藥血清+TGF-β1刺激）。MTT法檢測腎復(fù)康含藥血清對HK-2細(xì)胞活力的影響;顯微鏡下觀察各組細(xì)胞間形態(tài)學(xué)的差異;ELISA法檢測各組細(xì)胞上清液中I型膠原（collagen I）和纖維連接蛋白（fibronectin）的水平;q-PCR法檢測各組細(xì)胞內(nèi)E-鈣黏蛋白（E-cadherin）、波形纖維蛋白（Vimentin）、α-平滑肌肌動蛋白（α-SMA）和整聯(lián)蛋白連接激酶（ILK）基因的表達(dá)水平;蛋白免疫印跡法檢測Smad2/3總蛋白、核蛋白表達(dá)及其磷酸化水平;蛋白免疫印跡法檢測下游的ILK蛋白表達(dá)水平。結(jié)果:腎復(fù)康含藥血清對HK-2細(xì)胞的存活率無抑制作用;與空白對照組比較,模型對照... 

【文章來源】：中藥藥理與臨床. 2020,36(04)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：5 頁

【部分圖文】：

腎復(fù)康對轉(zhuǎn)化生長因子-β1(TGF-β1)誘導(dǎo)HK-2細(xì)胞纖維化模型形態(tài)學(xué)改變的影響(倒置顯微鏡,×100)

與空白對照組比較,模型對照組Smad2/3的磷酸化水平及核內(nèi)蛋白表達(dá)顯著上調(diào)(P<0.01);與模型對照組比較,尿毒清30%含藥血清組和18.32 g/kg腎復(fù)康30%含藥血清組Smad2/3的磷酸化水平及核內(nèi)表達(dá)明顯降低(P<0.01)。見圖3和表5。表5 腎復(fù)康18.32 g/kg含藥血清對轉(zhuǎn)化生長因子-β1(TGF-β1)誘導(dǎo)HK-2細(xì)胞纖維化模型Smad2/3磷酸化水平的影響 ( x ˉ ±s,n=6) 組別 含藥血清濃度/(%) p-Smad2/3/t-Smad2/3 p-Smad2/3/Lamin B 空白對照 - 0.12±0.02** 0.14±0.03** TGF-β模型 - 0.38±0.08 0.41±0.12 尿毒清 32 0.18±0.04** 0.20±0.03** 腎復(fù)康 10 0.34±0.09 0.38±0.13 30 0.21±0.05** 0.24±0.08*

與空白對照組比較,模型對照組Vimentin、α-SMA和ILK的mRNA水平顯著升高(P<0.01),而E-cadherin的mRNA水平顯著降低(P<0.01);與模型對照組比較,尿毒清30%含藥血清組、18.32 g/kg腎復(fù)康10%、30%含藥血清組,Vimentin、α-SMA和ILK的mRNA水平均明顯下調(diào)(P<0.05或P<0.01),E-cadherin mRNA水平顯著上調(diào)(P<0.01)。見圖2,表3。表3 腎復(fù)康18.32 g/kg含藥血清對轉(zhuǎn)化生長因子-β1(TGF-β1)誘導(dǎo)HK-2細(xì)胞纖維化模型E-cadherin、Vimentin、α-SMA和ILK的mRNA表達(dá)的影響 ( x ˉ ±s,n=6) 組別 含藥血清濃度/(%) E-cadherin/ (2-ΔΔCt) Vimentin/ (2-ΔΔCt) α-SMA/ (2-ΔΔCt) ILK/(2-ΔΔCt) 空白對照 - 1.06±0.25** 0.92±0.17** 0.95±0.21** 1.11±0.30** TGF-β模型 - 0.34±0.07 2.31±0.39 1.97±0.26 2.45±0.43 尿毒清 32 0.93±0.24** 1.23±0.22** 1.19±0.16** 1.47±0.19** 腎復(fù)康 10 0.63±0.17** 1.57±0.36* 1.34±0.31* 1.86±0.38* 30 0.86±0.18** 1.31±0.32** 1.28±0.23** 1.62±0.35** 與模型對照組組比較*P<0.05(下同)。

【參考文獻(xiàn)】：
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