[目的]為探究半夏瀉心湯調(diào)節(jié)胃腸動力障礙的機制,本文首先通過運用CiteSpace軟件對WOS數(shù)據(jù)庫中ICC表型相關(guān)文獻進行可視化分析,為半夏瀉心湯對ICC表型維持及鈣離子調(diào)節(jié)蛋白影響的實驗研究提供知識基礎(chǔ)。再以ICC表型為核心,從ICC表型維持與鈣離子調(diào)節(jié)蛋白角度,揭示半夏瀉心湯影響ICC表型維持調(diào)節(jié)胃腸運動的細胞分子機制,對“心下痞”的內(nèi)涵進行揭示。[方法]制備半夏瀉心湯含藥血清,將穩(wěn)定培養(yǎng)傳代后的ICC,隨機分為空白組、對照組（正常大鼠血清）、低濃度組（5%半夏瀉心湯含藥血清）、中濃度組（10%半夏瀉心湯含藥血清）和高濃度組（20%半夏瀉心湯含藥血清）。藥物血清干預12h、24h和48h三個時間點后,分別進行檢測。利用免疫熒光雙染法,通過雙標記三組標記蛋白c-kit/α-SMA、c-kit/desmin和c-kit/SMMHC,觀察了半夏瀉心湯對小鼠ICC表型維持影響的形態(tài)表達差異,并摸索出半夏瀉心湯藥物血清干預條件。免疫印跡法檢測ICC中IP3R、RyR、PLC、c-kit、α-SMA、desmin、SMMHC和MLC-2的蛋白表達水平,實時定量熒光PCR法測定ICC中IP3R... 

【文章來源】：北京中醫(yī)藥大學北京市 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：106 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略詞表
文獻綜述
    綜述一 基于CiteSpace的ICC表型相關(guān)領(lǐng)域研究概述
        1 介紹
        2 CiteSpace數(shù)據(jù)與研究方法
        3 領(lǐng)域總論
        4 領(lǐng)域分論
        5 結(jié)語
        參考文獻
    綜述二 Cajal間質(zhì)細胞的相關(guān)研究進展
        1 ICC作為胃腸動力的“起搏器”
        2 ICC形態(tài)與超微結(jié)構(gòu)
        3 Ca~(2+)振蕩和相關(guān)離子通道激活
        4 “起搏器單元”
        5 SIP功能合胞體
        6 ICC表型的可塑性
        參考文獻
    綜述三 半夏瀉心湯現(xiàn)代研究進展
        1 半夏瀉心湯對胃分泌的調(diào)節(jié)
        2 半夏瀉心湯對胃組織的調(diào)節(jié)
        3 半夏瀉心湯對胃運動的調(diào)節(jié)
        4 半夏瀉心湯對胃電節(jié)律的調(diào)節(jié)
        5 半夏瀉心湯對胃腸細胞和分子的調(diào)節(jié)
        參考文獻
前言
技術(shù)路線圖
實驗一 小鼠胃Cajal間質(zhì)細胞分離、培養(yǎng)和鑒定
    1 材料與方法
        1.1 實驗動物
        1.2 主要藥品與試劑
        1.3 主要儀器設(shè)備
        1.4 小鼠ICC的分離與培養(yǎng)
        1.5 小鼠ICC的鑒定
    2 結(jié)果
        2.1 倒置熒光顯微鏡下ICC的形態(tài)觀察
        2.2 ICC的鑒定
    3 討論
        3.1 ICC的培養(yǎng)
        3.2 ICC的鑒定
        3.3 總結(jié)與不足
實驗二 免疫熒光雙染觀察半夏瀉心湯對小鼠ICC表型維持的影響
    1 材料與方法
        1.1 實驗細胞
        1.2 主要藥品與試劑
        1.3 主要儀器設(shè)備
        1.4 含藥血清的制備
        1.5 新生小鼠原代胃cajal間質(zhì)細胞的培養(yǎng)和傳代
        1.6 細胞分組干預方法與干預時間
        1.7 免疫熒光雙染法觀察
        1.8 圖片處理與統(tǒng)計分析
    2 結(jié)果
        2.1 鏡下觀察
        2.2 半夏瀉心湯藥物血清不同劑量對ICC表型的影響
        2.3 半夏瀉心湯藥物血清不同干預時間對ICC表型的影響
    3 討論
        3.1 平滑肌細胞相關(guān)表型蛋白
        3.2 形態(tài)學觀察半夏瀉心湯對小鼠ICC表型維持的表達差異
實驗三 半夏瀉心湯對小鼠ICC表型維持和鈣離子調(diào)節(jié)蛋白的影響
    1 材料與方法
        1.1 實驗細胞
        1.2 主要藥品與試劑
        1.3 主要儀器設(shè)備
        1.4 含藥血清的制備
        1.5 ICC的培養(yǎng)
        1.6 細胞分組干預
        1.7 免疫印跡雜交法檢測IP3R、RyR、PLC、c-kit、α-SMA、desmin、SMMHC、MLC-2蛋白的表達
        1.8 實時熒光定量PCR法檢測IP3R、RyR3、PLC、c-kit、α-SMA、desmin、SMMHC、MLC-2 mRNA的表達
        1.9 統(tǒng)計學處理
    2 結(jié)果
        2.1 各組對ICC c-kit、α-SMA、desmin、SMMHC、MLC-2、IP3R、RyR、PLC蛋白表達的影響
        2.2 各組對ICC c-kit、α-SMA、desmin、SMMHC、MLC-2、IP3R、RyR3、PLC mRNA表達的影響
    3 討論
        3.1 鈣離子調(diào)節(jié)蛋白
        3.2 半夏瀉心湯對ICC表型維持及相關(guān)離子通道的調(diào)節(jié)
結(jié)語
參考文獻
附錄
    附錄1 激光共聚焦結(jié)果圖
    附錄2 RT-PCR中各基因擴增的標準曲線圖
    附錄3 RT-PCR中各基因?qū)崟r擴增曲線圖和擴增產(chǎn)物溶解曲線圖
致謝
在學期間主要研究成果
個人簡歷


【參考文獻】：
期刊論文
[1]安全疏散研究的科學知識圖譜[J]. 李杰,李平,謝啟苗,付姍姍.  中國安全科學學報. 2018(01)
[2]Cajal細胞及其離子通道調(diào)控機制的研究進展[J]. 高迪,沙磊.  醫(yī)學綜述. 2017(08)
[3]半夏瀉心湯及其苦降藥組促進胃腸動力的PK-PD研究[J]. 羅太敏,李晉奇,楊戈,張德,童榮生.  藥物評價研究. 2015(06)
[4]半夏瀉心湯加減治療慢性胃炎和消化性潰瘍與預防癌變的臨床效果分析[J]. 山努佳,華利霞.  中國繼續(xù)醫(yī)學教育. 2015(24)
[5]半夏瀉心湯加減配合中藥保留灌腸治療潰瘍性結(jié)腸炎的臨床效果分析[J]. 王華.  中國醫(yī)藥指南. 2015(05)
[6]西方經(jīng)濟地理學的知識結(jié)構(gòu)與研究熱點——基于CiteSpace的圖譜量化研究[J]. 李琬,孫斌棟.  經(jīng)濟地理. 2014(04)
[7]自由貿(mào)易區(qū)領(lǐng)域研究熱點與前沿探討——基于Citespace Ⅱ的計量分析[J]. 衣春波,許鑫.  上海經(jīng)濟研究. 2014(03)
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博士論文
[1]巨噬細胞活化對先天性巨結(jié)腸Cajal間質(zhì)細胞及腸道電活動的影響[D]. 陳緒勇.華中科技大學 2017
[2]胃電刺激對ICC表型及ICC-ENS突觸連接可塑性的影響[D]. 李翠萍.華中科技大學 2008
[3]小鼠小腸Cajal間質(zhì)細胞缺失模型的建立及SCF促其恢復研究[D]. 賈后軍.第三軍醫(yī)大學 2005

碩士論文
[1]CKD患者腎組織α-SMA的表達與頸動脈內(nèi)膜厚度的關(guān)系[D]. 周瑤.河北醫(yī)科大學 2014
[2]半夏瀉心湯對糖尿病大鼠Cajal間質(zhì)細胞、腸神經(jīng)系統(tǒng)及CBS的影響[D]. 蔣楠.安徽醫(yī)科大學 2014
[3]半夏瀉心湯調(diào)節(jié)胃腸動力的物質(zhì)基礎(chǔ)及作用機理研究[D]. 肖開春.西南交通大學 2013
[4]牽張應(yīng)變對小鼠小腸Cajal間質(zhì)細胞起搏電流的影響[D]. 韓燕飛.上海交通大學 2008



本文編號：3563184