目的:通過細(xì)胞體外實(shí)驗(yàn)檢測(cè)天然化合物N-Me-trichodermamide B（compound 1）對(duì)Ha Ca T細(xì)胞中核轉(zhuǎn)錄因子Nrf2、抗氧化反應(yīng)元件ARE及其下游Ⅱ相代謝酶HO-1表達(dá)的影響,并探索上游通路的活性。方法:首先通過CCK-8方法篩選出低毒性的化合物,采用流式細(xì)胞術(shù)并進(jìn)行氧化應(yīng)激細(xì)胞表型的研究,并最終篩選出1種具有抗氧化應(yīng)激的化合物。然后通過western blot、RT-q PCR、免疫熒光的方法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)HO-1的表達(dá)情況以及細(xì)胞內(nèi)Nrf2表達(dá)的影響;并通過western blot、免疫熒光的方法檢測(cè)Nrf2的入核情況;通過ARE質(zhì)粒轉(zhuǎn)染,檢測(cè)ARE熒光素酶活性;通過Nrf2基因沉默實(shí)驗(yàn),瞬時(shí)轉(zhuǎn)染小干擾RNA si-Nrf2進(jìn)入細(xì)胞內(nèi),轉(zhuǎn)染成功后再次檢測(cè)Nrf2、ARE、HO-1的活性表達(dá),探索三者間的活性關(guān)系;檢測(cè)磷酸化的蛋白激酶p38的表達(dá)水平;通過用p38特異性抑制劑預(yù)處理細(xì)胞4個(gè)小時(shí),隨后用待測(cè)化額合物作用于細(xì)胞,并檢測(cè)Nrf2、HO-1的表達(dá)情況。結(jié)果:篩選出的一種結(jié)構(gòu)新型的單體化合物N-Me-trichodermamide B（以compound... 

【文章來源】：湖南中醫(yī)藥大學(xué)湖南省

【文章頁數(shù)】：62 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

Nrf2/ARE信號(hào)通路作用機(jī)制

7種化后物濃度10μM，分別作用于HepG2,HaCaT,PC9三種細(xì)胞24小時(shí)和48小時(shí)，對(duì)三種細(xì)胞的生存率的影響

入 1mL 的 PBS 重懸細(xì)胞、并離心，目的酚紅），重復(fù) 2 次。L 的 PBS，渦旋儀上輕輕的渦旋，制成單細(xì)胞死亡實(shí)驗(yàn)aT 細(xì)胞經(jīng)過 6 種無細(xì)胞毒性的化合物預(yù)處理細(xì)胞存活率。與單獨(dú)加了 H2O2組相比，編誘導(dǎo)的細(xì)胞死亡現(xiàn)象，結(jié)果具有顯著性差合物 40 單獨(dú)做相同的實(shí)驗(yàn)，結(jié)果如圖 2.2沒有毒性作用，并且能夠濃度依賴性的減素（SFN）為抗氧化劑，在此實(shí)驗(yàn)中以 SFN

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Discovery of direct inhibitors of Keap1–Nrf2 protein–protein interaction as potential therapeutic and preventive agents[J]. Dhulfiqar Ali Abed,Melanie Goldstein,Haifa Albanyan,Huijuan Jin,Longqin Hu.  Acta Pharmaceutica Sinica B. 2015(04)



本文編號(hào)：3557865