目的:通過細胞體外實驗檢測天然化合物N-Me-trichodermamide B（compound 1）對Ha Ca T細胞中核轉(zhuǎn)錄因子Nrf2、抗氧化反應(yīng)元件ARE及其下游Ⅱ相代謝酶HO-1表達的影響,并探索上游通路的活性。方法:首先通過CCK-8方法篩選出低毒性的化合物,采用流式細胞術(shù)并進行氧化應(yīng)激細胞表型的研究,并最終篩選出1種具有抗氧化應(yīng)激的化合物。然后通過western blot、RT-q PCR、免疫熒光的方法檢測細胞內(nèi)HO-1的表達情況以及細胞內(nèi)Nrf2表達的影響;并通過western blot、免疫熒光的方法檢測Nrf2的入核情況;通過ARE質(zhì)粒轉(zhuǎn)染,檢測ARE熒光素酶活性;通過Nrf2基因沉默實驗,瞬時轉(zhuǎn)染小干擾RNA si-Nrf2進入細胞內(nèi),轉(zhuǎn)染成功后再次檢測Nrf2、ARE、HO-1的活性表達,探索三者間的活性關(guān)系;檢測磷酸化的蛋白激酶p38的表達水平;通過用p38特異性抑制劑預(yù)處理細胞4個小時,隨后用待測化額合物作用于細胞,并檢測Nrf2、HO-1的表達情況。結(jié)果:篩選出的一種結(jié)構(gòu)新型的單體化合物N-Me-trichodermamide B（以compound... 

【文章來源】：湖南中醫(yī)藥大學(xué)湖南省

【文章頁數(shù)】：62 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

Nrf2/ARE信號通路作用機制

7種化后物濃度10μM，分別作用于HepG2,HaCaT,PC9三種細胞24小時和48小時，對三種細胞的生存率的影響

入 1mL 的 PBS 重懸細胞、并離心，目的酚紅），重復(fù) 2 次。L 的 PBS，渦旋儀上輕輕的渦旋，制成單細胞死亡實驗aT 細胞經(jīng)過 6 種無細胞毒性的化合物預(yù)處理細胞存活率。與單獨加了 H2O2組相比，編誘導(dǎo)的細胞死亡現(xiàn)象，結(jié)果具有顯著性差合物 40 單獨做相同的實驗，結(jié)果如圖 2.2沒有毒性作用，并且能夠濃度依賴性的減素（SFN）為抗氧化劑，在此實驗中以 SFN

【參考文獻】：
期刊論文
[1]Discovery of direct inhibitors of Keap1–Nrf2 protein–protein interaction as potential therapeutic and preventive agents[J]. Dhulfiqar Ali Abed,Melanie Goldstein,Haifa Albanyan,Huijuan Jin,Longqin Hu.  Acta Pharmaceutica Sinica B. 2015(04)



本文編號：3557865