目的:通過解毒益智方作用于阿爾茨海默病轉(zhuǎn)基因線蟲的研究,觀察線蟲的存活率,癱瘓率及相關(guān)基因表達量的變化,以明探討解毒益智方對線蟲神經(jīng)損傷的作用機制。為藥物進入臨床提供實驗依據(jù)。方法:實驗所用的解毒益智方進行水提取制成凍干粉以備用,實驗選用轉(zhuǎn)基因Aβ1-42型CL4176秀麗隱桿線蟲作為實驗動物模型,經(jīng)同期化處理隨機分為模型組（0mg/L）、低劑量藥物組（25 mg/L）、中劑量藥物組（50 mg/L）、高劑量藥物組（100mg/L）。壽命實驗每組50條線蟲,每24小時對線蟲死亡數(shù)量進行計數(shù),根據(jù)線蟲非死亡數(shù)量繪制圖表,并對四組線蟲進行平均壽命、最大壽命進行分析。Aβ引起神經(jīng)損傷實驗測定（癱瘓率實驗）每組30條線蟲,每2小時進行觀察線蟲癱瘓及死亡數(shù)量,根據(jù)線蟲非癱瘓數(shù)量繪制圖表,進行數(shù)據(jù)分析。選取模型組與中劑量組線蟲,每組100條,將同期化的線蟲在16℃培養(yǎng)48h后轉(zhuǎn)移至25℃進行誘導(dǎo),誘導(dǎo)48h后,分別提取線蟲體內(nèi)的總mRNA,之后進行反轉(zhuǎn)錄合成cDNA,最后進行實時熒光定量PCR來檢測TNFAIP1 homolog（F22E5.6、ZC239.12）,HSP16.2（Y46H3A.D... 

【文章來源】：長春中醫(yī)藥大學(xué)吉林省

【文章頁數(shù)】：39 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

所示不同濃度解毒益智方對線蟲壽命的影響

.2 解毒益智方對線蟲癱瘓率影響選用同期化 48h 的 CL4176 線蟲轉(zhuǎn)移到含有高中低濃度的解毒益智方提取物的培養(yǎng)中，放置于 25℃下進行培養(yǎng)。觀察線蟲癱瘓情況，每兩小時進行一次測定。線蟲只部可以進行擺動記為癱瘓。實驗結(jié)果如下圖所示：如圖 2 所示,行為學(xué)實驗表明解毒益智方能夠延緩和改善線蟲癱瘓。在經(jīng)過 40h-7間，藥物組與模型組非癱瘓率存在明顯差異，其中低劑量（25mg/L）藥物組個時間癱瘓率均高于模型組，其中 76h 時二組線蟲非癱瘓率差別最大，低劑量藥物組為3.33%，模型組為 40%。中劑量（50mg/L）和高劑量（100mg/L）藥物組非癱瘓率均低型組。由此可推斷，解毒益智方的延緩癱瘓并不呈濃度依賴型，低劑量（25mg/L）組可作為其給藥的理想濃度。高濃度解毒益智方會降低正向保護效應(yīng)。

據(jù)圖 3 所示，結(jié)果表明解毒益智方提高了線蟲 TNFAIP1 homolog（F22E5.6、ZC239.12），HSP16.2（Y46H3A.D），HSP16.41（Y46H3A.E）基因的轉(zhuǎn)錄水平，這表明解毒益智方可以通過增加體內(nèi) TNFAIP1，HSP16.2，HSP16.41 等相關(guān)基因，進而起到神經(jīng)保護作用及延緩線蟲衰老的作用。

【參考文獻】：
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碩士論文
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本文編號：3532988