目的探究黃芪甲苷能否通過抑制內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激（Endoplasmic reticulum stress,ERS）發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用,并探討其可能的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制。方法（1）高分化的PC12細(xì)胞（大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞）常規(guī)培養(yǎng),為了探究不同濃度的ERS誘導(dǎo)劑2-DG對(duì)ERS以及線粒體膜電位（mitochondrial membrane potential,?Ψm）產(chǎn)生的不同影響,將細(xì)胞隨機(jī)分成對(duì)照組和多種不同濃度（25、50、100、150、200μM）2-DG組,用Western Blot法檢測(cè)ERS相關(guān)蛋白GRP 78、94表達(dá)情況,同時(shí)使用激光共聚焦顯微鏡檢測(cè)TMRE紅色熒光強(qiáng)度的改變來判斷線粒體通透性轉(zhuǎn)移孔（mitochondrial permeability transition pore,m PTP）開放的情況,以確定2-DG最適濃度。（2）將細(xì)胞隨機(jī)分成對(duì)照組和不同濃度（25、50、75、100μM）黃芪甲苷組,通過Western Blot法檢測(cè)黃芪甲苷對(duì)糖原合成酶激酶-3β（glycogen synthase kinase-3β,GSK-3β）磷酸化的表達(dá)以確定黃芪甲苷最適濃度... 

【文章來源】：華北理工大學(xué)河北省

【文章頁數(shù)】：63 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

蛋白定量標(biāo)準(zhǔn)曲線

圖 2 2-DG 對(duì)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激蛋白 GRP 78 、GRP 94 表達(dá)的影響Fig.2 Effect of 2-DG on the expression of endoplasmic reticulum stress protein GRP 78 and GRP 941.2.2 2-DG 能夠使線粒體膜電位降低(mPTP 開放)并確定最適濃度為了探究 2-DG 能否引起 mPTP 開放，以及它的最佳作用濃度，實(shí)驗(yàn)中我們應(yīng)用激光共聚焦顯微鏡技術(shù)，檢測(cè)各組細(xì)胞內(nèi)線粒體膜電位的變化，結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，不同濃度 2-DG 組均可以減少線粒體 TMRE 紅色熒光強(qiáng)度，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。2-DG 濃度為 50 μmol/L 時(shí)，TMRE 紅色熒光強(qiáng)度最弱，線粒體膜電位降低最明顯即 mPTP 開放程度最大，說明 2-DG 濃度為 50 μmol/L 時(shí)最易引起 ERS，見表 3、圖 3，圖 3 中標(biāo)尺為 20 μm。因此后續(xù)實(shí)驗(yàn)均采用此濃度。表 3 2-DG 對(duì)線粒體膜電位(mPTP 開放)的影響 (Mean±SE)Table 3 Effect of 2-DG on mitochondrial membrane potential (mPTP opening) (Mean±SE)Group(μmol/L) n TMRE Fluorescence F P0 6 10 0.0±1.38 －

圖 3 2-DG 對(duì)線粒體膜電位(mPTP 開放)的影響(x1000)Fig. 3 Effect of 2-DG on mitochondrial membrane potential (mPTP opening) (x10001.2.3 黃芪甲苷能使 GSK-3β 磷酸化增加并確定最適濃度為了探究黃芪甲苷的最佳作用濃度，實(shí)驗(yàn)中我們采用 Western blot 法檢測(cè)不同濃度黃芪甲苷對(duì) p-GSK-3β 表達(dá)的影響，結(jié)果顯示，與對(duì)照組比，不同濃度黃芪甲苷組 p-GSK-3β 表達(dá)不同，其中 50 μmol/L 黃芪甲苷組 p-GSK-3β 蛋白表達(dá)增多最明顯，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，說明黃芪甲苷能使 GSK-3β 磷酸化增加并確定最適濃度為 50 μmol/L，見表 4、圖 4。因此后續(xù)實(shí)驗(yàn)中黃芪甲苷的濃度使用為50 μmol/L。表 4 黃芪甲苷對(duì) GSK-3β 磷酸化表達(dá)的影響 (Mean±SE)Table 4 Effects of Astragaloside on Phosphorylation of GSK-3β (Mean±SE)GSK-3β

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號(hào)：3532690