背景和目的:山梔苷是我國(guó)傳統(tǒng)中藥梔子的有效成分之一,常作為相關(guān)中藥飲片、中成藥質(zhì)量研究的標(biāo)志物。但在常見(jiàn)的抗炎、抗氧化測(cè)試中,效果卻不如梔子苷等其他環(huán)烯醚萜類(lèi)化合物。本研究采用分子對(duì)接技術(shù),測(cè)試山梔苷對(duì)未折疊蛋白反應(yīng)三條通路中節(jié)點(diǎn)蛋白的對(duì)接情況,進(jìn)而利用6-OHDA誘導(dǎo)損傷的SH-SY5Y細(xì)胞構(gòu)建帕金森病的體外模型,檢測(cè)山梔苷的保護(hù)作用及相關(guān)通路蛋白的表達(dá)情況,旨在為山梔苷的活性研究提供依據(jù)和思路。方法:（1）利用Autodock軟件將山梔苷與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)的PERK、Bi P、IRE1蛋白進(jìn)行虛擬分子對(duì)接,并分析對(duì)接結(jié)果。（2）利用6-OHDA處理SH-SY5Y細(xì)胞構(gòu)建帕金森病的體外模型,采用CCK-8、LDH法檢測(cè)山梔苷的保護(hù)作用,另以衣霉素預(yù)處理激活內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激,觀察山梔苷保護(hù)作用的變化情況;采用Hoechst33258熒光染色及Annexin V-FITC/PI觀察細(xì)胞凋亡情況;DIO-C6（3）染色觀察內(nèi)質(zhì)網(wǎng)情況;MDC染色觀察細(xì)胞自噬;Western blot檢測(cè)PERK-e IF2α-ATF4-CHOP以及自噬相關(guān)蛋白LC3、凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2和Bax的表達(dá)情況。結(jié)果:... 

【文章來(lái)源】：吉林大學(xué)吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

山梔苷分子結(jié)構(gòu)

圖 2.2 對(duì)接結(jié)果的結(jié)合能分析2.3.2 最優(yōu)對(duì)接結(jié)果的構(gòu)象信息表 2.2 最優(yōu)構(gòu)象的信息比較對(duì)接蛋白 PDB 編碼 小分子配體 結(jié)合能(kcal/mol) 抑制常數(shù)(μM)PERK 4g31 山梔苷 -5.06 196.74PERK 4g31 GSK2606414 -10.71 0.01408GRP78 3ldo 山梔苷 -3.43 3070IRE1 3lj1 山梔苷 -2.79 9080最優(yōu)對(duì)接構(gòu)象信息如表 2.2 所示，山梔苷與 PERK 蛋白結(jié)合能為-5.06kcal/mol，抑制常數(shù)為 196.74 μM；GSK2606414 與 PERK 蛋白結(jié)合能為-10.71kcal/mol，抑制常數(shù)為 0.01408 μM。由此可見(jiàn)，雖然山梔苷與 PERK 的結(jié)合自由能及抑制常數(shù)均大于 PERK 蛋白特異性小分子抑制劑 GSK2606414，但較內(nèi)

質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激另外兩條通路蛋白 GRP78、IRE1 都要小很多。2.3.3 最優(yōu)對(duì)接的構(gòu)象圖如圖 2.3 所示，從對(duì)接結(jié)果 PyMOL 處理的最優(yōu)對(duì)接構(gòu)象圖來(lái)看，山梔苷與PERK 蛋白和 GSK2606414 與 PERK 蛋白的對(duì)接位點(diǎn)在同一“對(duì)接口袋”中，而山梔苷與 BiP 蛋白、山梔苷與 IRE1 蛋白的對(duì)接位點(diǎn)則更靠近蛋白分子表面。第 2 章 山梔苷與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激靶標(biāo)蛋白的分子對(duì)接

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Salidroside Protects Against 6-Hydroxydopamine-Induced Cytotoxicity by Attenuating ER Stress[J]. Kai Tao,Bao Wang,Dayun Feng,Wei Zhang,Fangfang Lu,Juan Lai,Lu Huang,Tiejian Nie,Qian Yang.  Neuroscience Bulletin. 2016(01)
[2]基于分子對(duì)接技術(shù)的高頻降脂藥對(duì)作用機(jī)制研究[J]. 蔣蘆荻,賀昱甦,陳茜,陶歐,李貢宇,張燕玲.  中國(guó)中藥雜志. 2015(12)



本文編號(hào)：3514113