目的:通過(guò)建立體外高糖誘導(dǎo)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（HUVECs）損傷模型,研究黃芪甲苷（AS-IV）對(duì)高糖誘導(dǎo)HUVECs損傷的保護(hù)作用及其分子機(jī)制,為糖尿病及其并發(fā)癥的防治提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)與新思路。方法:1建立體外高糖損傷人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞模型體外培養(yǎng)HUVECs細(xì)胞株,按培養(yǎng)基終末葡萄糖濃度不同,隨機(jī)分為2組:正常對(duì)照組（葡萄糖濃度5.55 mM）;高糖損傷組（葡萄糖濃度分別為11.1、22.2、33.3、44.4 mM）,不同組之間用甘露醇平衡滲透壓。各組分別培養(yǎng)時(shí)間24h、48h、72h后,光學(xué)倒置顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué);MTT法檢測(cè)細(xì)胞存活率;Hoechst33258染色觀察細(xì)胞凋亡形態(tài)。2黃芪甲苷對(duì)高糖誘導(dǎo)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞炎性損傷保護(hù)作用機(jī)制研究實(shí)驗(yàn)分為5組:正常對(duì)照組（葡萄糖濃度5.55 mM 48h）;高糖模型組（葡萄糖濃度33.3 mM 48h）;JNK抑制劑組（葡萄糖濃度33.3 mM 48h后加入JNK抑制劑SP600125濃度20μM）;黃芪甲苷組（葡萄糖濃度33.3 mM 48h后加入黃芪甲苷濃度50μM）;JNK抑制劑+黃芪甲苷組（葡萄糖濃度33.3 mM 48h后,JN... 

【文章來(lái)源】：安徽中醫(yī)藥大學(xué)安徽省

【文章頁(yè)數(shù)】：84 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

各濃度葡萄糖組HUVECs形態(tài)學(xué)比較（10×20）

值為21.89 mM，接近22.2mM，此時(shí)間下細(xì)胞穩(wěn)定較差，部分細(xì)胞漂浮。因此，接下來(lái)的實(shí)驗(yàn)選擇終末濃度為33.3mM葡萄糖濃度培養(yǎng)液處理48h的HUVECs為高糖損傷模型細(xì)胞。見表1，圖2。表1 不同時(shí)間、不同葡萄糖濃度對(duì)臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞活力的影響 （x S，n=6）Tab.1 Effects of glucose on the cell viability of HUVECs at 24,48,72h ( x S, n=6)Glucose（mM）cell viability (% 0f 5.55 mM)24 48 725.55100 100 10011.1100.5±8.7 82.5±10.7 73.2±5.722.279.3±5.4 61.2±4.9** 43.3±5.6 **33.372.4±8.8** 50.5±6.4** 36.3±6.9**44.468.3±9.0** 39.1±9.1** 26.4±1.9**注：與 5.55 mM 組比較，*p<0.05，**p<0.01圖2 不同時(shí)間、不同葡萄糖濃度對(duì)臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞活力的影響（x S，n=6）Fig.2 Effects of glucose on the cell viability of HUVECs at 24, 48, 72h (x S, n=6)注：與 5.55 mM 組比較，*P<0.05，**P<0.01

過(guò) JNK 信號(hào)通路對(duì)高糖誘導(dǎo)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞炎性損傷的保護(hù)作用機(jī)制研究33258 染色觀察細(xì)胞凋亡確定高糖誘導(dǎo) HUVECs 損傷并促進(jìn)細(xì)胞凋亡，使用 Hoechst核凋亡細(xì)胞形態(tài)進(jìn)行評(píng)估。當(dāng)細(xì)胞發(fā)生凋亡 Hoechst 33258 染鏈 DNA 結(jié)合，產(chǎn)生比熒光染料自身更強(qiáng)的熒光。因此，凋亡于正常細(xì)胞。本組實(shí)驗(yàn)于倒置熒光顯微鏡下觀察到 5.55mM 葡均勻黯淡的藍(lán)色，核形狀完整，染色質(zhì)熒光表達(dá)均一，隨著葡核呈濃縮碎塊狀變化，表現(xiàn)為熒光增加的藍(lán)白色致密濃染葡萄糖濃度依賴性，表明高濃度的葡萄糖誘導(dǎo) HUVECs 發(fā)生

【參考文獻(xiàn)】：
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