補腎活血湯對裸鼠乳腺癌骨轉移模型及OPG/RANK/RANKL系統(tǒng)影響的研究
發(fā)布時間：2021-11-09 23:36
目的:構建裸鼠乳腺癌骨轉移模型,觀察并研究補腎活血湯對裸鼠乳腺癌骨轉移模型OPG/RANKL/RANK系統(tǒng)的影響。方法:將雌性裸鼠56只,按體重分層后以完全隨機法分為空白組、模型組、唑來膦酸組、補腎活血高、中、低濃度組、活血組、補腎組,每組7只,共8組。除去空白組,所有組別同時構建乳腺癌骨轉移模型。具體構建步驟如下:將（0.1ml,1×107/ml）人乳腺癌MDA-MB-231細胞混懸液注射于裸鼠左心室以構建乳腺癌骨轉移模型,構建模型成功后,密切觀察裸鼠生命活動并記錄裸鼠體質質量變化情況。在造模成功后的第二天開始,除空白組不做處理,照常飼養(yǎng),對其余各組進行持續(xù)6周的藥物進行干預,具體藥物干預方法如下:模型組給予每日0.2ml 0.9%NS灌胃;唑來膦酸組予以每周1次（100μg/kg）的腹腔注射;補腎活血湯低濃度組、補腎活血湯中濃度組、補腎活血湯高濃度組裸鼠予以生藥灌胃,濃度依次為每日10.5g/kg·d、21g/kg·d、42g/kg·d;活血組（補腎活血湯拆方所得）每日予以生藥灌胃,濃度為3.6g/kg·d;補腎組（補腎活血湯拆方所得）每日予以生藥灌胃,濃度為17.4g/kg·d。...
【文章來源】：湖南中醫(yī)藥大學湖南省
【文章頁數(shù)】：48 頁
【學位級別】：碩士
【部分圖文】：
培養(yǎng)中的人乳腺癌細胞
2.1.1 細胞培養(yǎng)在75 ㎝2面積的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)人乳腺癌MDA-MB-231 細胞，采用DMEM高糖培養(yǎng)+10%FBS+雙抗（100U/ml青/鏈霉素），控制培養(yǎng)箱溫度為 37℃、5%CO2的飽和濕度。2.1.2 人乳腺癌細胞的傳代過程人乳腺癌 MDA-MB-231 細胞（圖 1）培養(yǎng) 2-3 天左右，細胞即生長至90%融合，此時開始傳代。具體方法如下:①將瓶內舊培養(yǎng)基棄去②用 1ml 移液槍頭吸取2mlPBS液洗滌培養(yǎng)瓶2次③在瓶內加入2ml 0.25%胰蛋白酶并使其均勻平鋪遍布所有細胞表面，靜置后于顯微鏡下可見細胞變圓且細胞間隙增大（圖 2）④立即加入培養(yǎng)基 4ml-5ml 中和胰酶終止消化⑤用巴氏吸管反復吹打瓶內細胞，使其形成單細胞懸液⑥之后將混懸液移液到 3 個 75 ㎝2培養(yǎng)瓶中進行體外傳代，并分別加入5-7ml左右培養(yǎng)基，放置培養(yǎng)箱中培養(yǎng)（37℃、5%CO2的飽和濕度）。
⑷將含有乳腺癌MDA-MB-231細胞混懸液的培養(yǎng)液用移液槍頭吸取至離心管中，打開離心機，設置轉速：（1000rpm/min），設定離心時間 5min ，離心完成之后棄上清液，重復加入5mlPBS 再次離心，棄上清液，再加 2mlPBS，反復輕輕吹打，混懸，最終制成 1×107/ml 的乳腺癌細胞懸液，用冰盒保存（過程中離心管口反復酒精燈火焰消毒）。2.2 飼養(yǎng)裸鼠所有實驗所用裸鼠均在湖南中醫(yī)藥大學實驗樓SPF級實驗室飼養(yǎng)，分籠飼養(yǎng)，每籠7只，在人工光照周期下，自由進食和水（圖 3），自然喂養(yǎng)1周后依照體重分層，隨機數(shù)字表法分為補腎組、模型組、空白組、唑來膦酸組、補腎活血高、中、低濃度組、活血組共8 組，每組 7 只。除空白組外，其余組均開始造模。注：造模前各組統(tǒng)一飼養(yǎng)，避免人為分組提前造成選擇性偏移。
【參考文獻】：
期刊論文
[1]補腎活血方應用于多囊卵巢綜合征患者的效果及對生殖激素的影響分析[J]. 徐玉慧. 醫(yī)學理論與實踐. 2018(21)
[2]基于OPG/RANKL/RANK信號通路探究中藥對破骨細胞的調控作用[J]. 張楚天,林燕萍. 康復學報. 2018(05)
[3]中醫(yī)“腎精”的現(xiàn)代醫(yī)學內涵[J]. 徐德成,馬迎民,范吉平. 中醫(yī)雜志. 2017(22)
[4]中醫(yī)藥治療乳腺癌進展[J]. 周思穎,張思杰,徐寒子,孫大偉,唐金海. 中國中醫(yī)基礎醫(yī)學雜志. 2017(10)
[5]逍遙散合二至丸加減治療乳腺癌內分泌治療后類更年期綜合征臨床觀察[J]. 趙淑媛,趙常國,楊小霞. 四川中醫(yī). 2017(06)
[6]淫羊藿次苷Ⅰ及其代謝產物淫羊藿次苷Ⅱ通過AP-1/NFATc1信號通路調控破骨細胞生成[J]. 賀龍剛,高奧,邱煌沛,李文,林曉輝,周麗. 中華中醫(yī)藥雜志. 2017(03)
[7]乳腺癌骨轉移過程中的分子機制[J]. 吳玲,王佳,吳英,夏添松. 中國腫瘤外科雜志. 2017(01)
[8]乳腺癌骨轉移機制與靶向治療進展[J]. 魯光平,殷詠梅,周雪峰,潘驥群,陳進. 現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學. 2017(02)
[9]補腎活血湯對SDF-1α誘導的人乳腺癌MDA-MB-231細胞增殖及遷移的影響[J]. 楊爭,胡金輝,王希,方穎,袁博,陳杏元,劉德果. 時珍國醫(yī)國藥. 2016(08)
[10]中國抗癌協(xié)會乳腺癌診治指南與規(guī)范（2015版）[J]. 中國癌癥雜志. 2015(09)
博士論文
[1]補腎壯骨中藥對大鼠乳腺癌骨轉移模型的影響[D]. 姚暄.北京中醫(yī)藥大學 2009
碩士論文
[1]補腎活血湯對裸鼠乳腺癌骨轉移模型和Jagged1/Notch及TGF-β通路蛋白的干預研究[D]. 王賢彬.湖南中醫(yī)藥大學 2018
[2]補腎法對絕經后芳香化酶抑制劑治療乳腺癌患者雌激素水平的影響[D]. 喻璐.廣州中醫(yī)藥大學 2012
本文編號：3486122
【文章來源】：湖南中醫(yī)藥大學湖南省
【文章頁數(shù)】：48 頁
【學位級別】：碩士
【部分圖文】：
培養(yǎng)中的人乳腺癌細胞
2.1.1 細胞培養(yǎng)在75 ㎝2面積的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)人乳腺癌MDA-MB-231 細胞，采用DMEM高糖培養(yǎng)+10%FBS+雙抗（100U/ml青/鏈霉素），控制培養(yǎng)箱溫度為 37℃、5%CO2的飽和濕度。2.1.2 人乳腺癌細胞的傳代過程人乳腺癌 MDA-MB-231 細胞（圖 1）培養(yǎng) 2-3 天左右，細胞即生長至90%融合，此時開始傳代。具體方法如下:①將瓶內舊培養(yǎng)基棄去②用 1ml 移液槍頭吸取2mlPBS液洗滌培養(yǎng)瓶2次③在瓶內加入2ml 0.25%胰蛋白酶并使其均勻平鋪遍布所有細胞表面，靜置后于顯微鏡下可見細胞變圓且細胞間隙增大（圖 2）④立即加入培養(yǎng)基 4ml-5ml 中和胰酶終止消化⑤用巴氏吸管反復吹打瓶內細胞，使其形成單細胞懸液⑥之后將混懸液移液到 3 個 75 ㎝2培養(yǎng)瓶中進行體外傳代，并分別加入5-7ml左右培養(yǎng)基，放置培養(yǎng)箱中培養(yǎng)（37℃、5%CO2的飽和濕度）。
⑷將含有乳腺癌MDA-MB-231細胞混懸液的培養(yǎng)液用移液槍頭吸取至離心管中，打開離心機，設置轉速：（1000rpm/min），設定離心時間 5min ，離心完成之后棄上清液，重復加入5mlPBS 再次離心，棄上清液，再加 2mlPBS，反復輕輕吹打，混懸，最終制成 1×107/ml 的乳腺癌細胞懸液，用冰盒保存（過程中離心管口反復酒精燈火焰消毒）。2.2 飼養(yǎng)裸鼠所有實驗所用裸鼠均在湖南中醫(yī)藥大學實驗樓SPF級實驗室飼養(yǎng)，分籠飼養(yǎng)，每籠7只，在人工光照周期下，自由進食和水（圖 3），自然喂養(yǎng)1周后依照體重分層，隨機數(shù)字表法分為補腎組、模型組、空白組、唑來膦酸組、補腎活血高、中、低濃度組、活血組共8 組，每組 7 只。除空白組外，其余組均開始造模。注：造模前各組統(tǒng)一飼養(yǎng)，避免人為分組提前造成選擇性偏移。
【參考文獻】：
期刊論文
[1]補腎活血方應用于多囊卵巢綜合征患者的效果及對生殖激素的影響分析[J]. 徐玉慧. 醫(yī)學理論與實踐. 2018(21)
[2]基于OPG/RANKL/RANK信號通路探究中藥對破骨細胞的調控作用[J]. 張楚天,林燕萍. 康復學報. 2018(05)
[3]中醫(yī)“腎精”的現(xiàn)代醫(yī)學內涵[J]. 徐德成,馬迎民,范吉平. 中醫(yī)雜志. 2017(22)
[4]中醫(yī)藥治療乳腺癌進展[J]. 周思穎,張思杰,徐寒子,孫大偉,唐金海. 中國中醫(yī)基礎醫(yī)學雜志. 2017(10)
[5]逍遙散合二至丸加減治療乳腺癌內分泌治療后類更年期綜合征臨床觀察[J]. 趙淑媛,趙常國,楊小霞. 四川中醫(yī). 2017(06)
[6]淫羊藿次苷Ⅰ及其代謝產物淫羊藿次苷Ⅱ通過AP-1/NFATc1信號通路調控破骨細胞生成[J]. 賀龍剛,高奧,邱煌沛,李文,林曉輝,周麗. 中華中醫(yī)藥雜志. 2017(03)
[7]乳腺癌骨轉移過程中的分子機制[J]. 吳玲,王佳,吳英,夏添松. 中國腫瘤外科雜志. 2017(01)
[8]乳腺癌骨轉移機制與靶向治療進展[J]. 魯光平,殷詠梅,周雪峰,潘驥群,陳進. 現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學. 2017(02)
[9]補腎活血湯對SDF-1α誘導的人乳腺癌MDA-MB-231細胞增殖及遷移的影響[J]. 楊爭,胡金輝,王希,方穎,袁博,陳杏元,劉德果. 時珍國醫(yī)國藥. 2016(08)
[10]中國抗癌協(xié)會乳腺癌診治指南與規(guī)范（2015版）[J]. 中國癌癥雜志. 2015(09)
博士論文
[1]補腎壯骨中藥對大鼠乳腺癌骨轉移模型的影響[D]. 姚暄.北京中醫(yī)藥大學 2009
碩士論文
[1]補腎活血湯對裸鼠乳腺癌骨轉移模型和Jagged1/Notch及TGF-β通路蛋白的干預研究[D]. 王賢彬.湖南中醫(yī)藥大學 2018
[2]補腎法對絕經后芳香化酶抑制劑治療乳腺癌患者雌激素水平的影響[D]. 喻璐.廣州中醫(yī)藥大學 2012
本文編號：3486122
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