黃精是我國衛(wèi)生部認(rèn)定的藥食同源資源,在天然藥物和功能食品等領(lǐng)域具有廣闊的應(yīng)用前景。皂苷是黃精中的主要活性物質(zhì),由于結(jié)構(gòu)多樣,其抗菌、抗腫瘤的機制也各不相同。對這些機制進(jìn)行研究,將為黃精資源的綜合利用提供理論依據(jù)和技術(shù)支持。本論文以九華黃精為原料,制備了高純度的薯蕷皂苷和甲基原薯蕷皂苷,并研究了其抑癌活性及相關(guān)分子機制,主要研究內(nèi)容及結(jié)果如下:（1）黃精皂苷的分離純化。使用單因素和響應(yīng)面優(yōu)化試驗,確定了超聲輔助提取黃精皂苷的最佳工藝條件:乙醇濃度78%、料液比1:20 g/mL、超聲溫度58°C、超聲時間75 min,在此條件下的皂苷得率為2.72%;在此基礎(chǔ)上,利用硅膠色譜柱、葡聚糖凝膠柱層析技術(shù)對提取物中的皂苷進(jìn)行分離,得到純度分別為98.05%和95.13%的薯蕷皂苷和甲基原薯蕷皂苷,并使用UPLC-TOF-MS/MS和NMR技術(shù)對其結(jié)構(gòu)進(jìn)行了鑒定。（2）薯蕷皂苷對人肝癌細(xì)胞HepG2的抑制及分子機制。細(xì)胞活性及周期分析表明,薯蕷皂苷對HepG2細(xì)胞的半抑制濃度為8.34μM,可將細(xì)胞周期阻滯在G2/M期;當(dāng)處理濃度為9μM時,早期凋亡細(xì)胞比率可達(dá)34.0%。薯蕷皂苷通過調(diào)節(jié)CHK... 

【文章來源】：合肥工業(yè)大學(xué)安徽省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：82 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

薯蕷皂苷元標(biāo)準(zhǔn)曲線

（3）超聲溫度對黃精皂苷提取得率的影響在料液比為 1:20 g/mL、乙醇濃度 80%、超聲時間 50 min 的條件下，比較不同的超聲溫度（30、40、50、60、70 ℃）對黃精皂苷提取得率的影響，結(jié)果如圖 2.2C 所示。結(jié)果表明，在 60 ℃之前，隨著溫度的升高，黃精皂苷的得率不斷升高，當(dāng)超聲溫度達(dá)到 60 ℃時，皂苷的提取得率達(dá)到最大值 1.73%。而溫度高于 60 ℃時，得率開始呈現(xiàn)下降趨勢，可能是溫度過高導(dǎo)致皂苷的結(jié)構(gòu)受到了一定程度的破壞。因此，本試驗中選取的最佳超聲溫度為 60 ℃。（4）超聲時間對黃精皂苷提取得率的影響在料液比為 1:20 g/mL、乙醇濃度 80%和超聲溫度 60 ℃條件下，比較不同的超聲時間（40、50、60、70、80 min）對黃精皂苷得率的影響，結(jié)果如圖 2.2D所示，隨著超聲時間的延長，黃精皂苷得率先逐步升高后略有降低，70 min 時，達(dá)到最高值。這是因為超聲時間的增加可以使黃精粉末與乙醇溶液更充分地接觸從而促進(jìn)皂苷的溶出，但當(dāng)處理時間過長時，分子量較大、不穩(wěn)定的皂苷易發(fā)生分解，且伴隨著其他醇溶物質(zhì)的不斷溶出，從而降低了黃精皂苷的提取得率。因此，試驗選取 70 min 作為黃精皂苷的最佳超聲時間。

的提取得率隨乙醇濃度的升高先上升后平緩下降，并隨超聲時間的不斷增加而呈現(xiàn)緩慢上升后逐步下降的趨勢。超聲時間越長，會有更多的物質(zhì)溶出，但同時，長時間的超聲影響可能會使皂苷的內(nèi)部結(jié)構(gòu)發(fā)生變化，其他物質(zhì)的溶出也限制了皂苷得率的提高。如圖 2.3D，料液比和超聲時間也會影響黃精皂苷的提取得率。由于雜質(zhì)的不斷溶出，黃精皂苷的提取得率隨液料比的增加呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢，超聲時間延長時也呈現(xiàn)出相似的趨勢。料液比和超聲溫度對黃精皂苷提取得率的影響如圖 2.3E。當(dāng)物料質(zhì)量一定時，適度提高的乙醇溶液的體積和超聲溫度會使皂苷的提取得率上升，然而過多的乙醇溶液和過高的超聲溫度會對黃精皂苷的提取得率產(chǎn)生一定影響。黃精皂苷提取得率隨超聲溫度升高及超聲時間延長變化的趨勢如圖 2.3F 所示。適宜條件下的超聲輔助可以有效提高提取的質(zhì)量和效率，但過高的超聲溫度和過長的超聲時間不能將提取得率無限提高，反而會導(dǎo)致目標(biāo)提取物結(jié)構(gòu)的破壞和提取得率的降低。如圖所示，皂苷的提取得率在超聲溫度的升高時呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢，此外，當(dāng)超聲時間延長時，得率先上升后下降。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]細(xì)胞凋亡主要檢測方法及其應(yīng)用[J]. 何玉婷,楊雯,王改琴,張旭東.  醫(yī)學(xué)綜述. 2019(04)
[2]響應(yīng)面法優(yōu)化重樓藥材中甾體皂苷的回流提取工藝研究[J]. 王仕寶,蘇瑩,李會寧,楊培君,吳鵬.  陜西農(nóng)業(yè)科學(xué). 2019(01)
[3]黃精多糖提取工藝及功能作用研究進(jìn)展[J]. 賈宇涵,吳澎,郗良卿,李曉彤.  中國調(diào)味品. 2018(11)
[4]黃精皂苷提取條件的Design-Expert優(yōu)化及其降血糖效果初步研究[J]. 龐紅霞,崔婧,范桂強,魏昭,馬娜.  中國藥師. 2018(09)
[5]HPLC法測定不同產(chǎn)地穿山龍中原薯蕷皂苷、原纖細(xì)薯蕷皂苷、甲基原薯蕷皂苷、偽原薯蕷皂苷、薯蕷皂苷和纖細(xì)薯蕷皂苷[J]. 尚�；�,鄭雅楠,王淼,白潤,張保燦,廖茂梁.  現(xiàn)代藥物與臨床. 2018(08)
[6]皂苷提取分離技術(shù)研究新進(jìn)展[J]. 宋易霖,劉婷,鄧海山,韓疏影,池玉梅.  廣東化工. 2018(12)
[7]黃精屬植物中黃酮類化合物及其藥理活性研究進(jìn)展[J]. 陶愛恩,張曉燦,杜澤飛,趙飛亞,夏從龍,段寶忠.  中草藥. 2018(09)
[8]G2/M期P53/CDK1通路對卵巢癌細(xì)胞增殖和凋亡的影響[J]. 張瑞濤,史惠蓉,任芳,曹媛,姬鵬程,王文文.  安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報. 2018(04)
[9]CDK4/6抑制劑抗腫瘤作用研究進(jìn)展[J]. 朱穎.  現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué). 2018(04)
[10]紫山藥薯蕷皂苷元酶法提取優(yōu)化及抗氧化性[J]. 王彥平,楊慶瑩,孫瑞琳,古洋,陳月英.  食品工業(yè). 2017(07)

碩士論文
[1]沙利度胺聯(lián)合奧沙利鉑、5-氟尿嘧啶對人肝癌HepG2細(xì)胞的VEGF、Caspase-3基因表達(dá)的研究[D]. 孫媛.承德醫(yī)學(xué)院 2015
[2]硼替佐米聯(lián)合5-氟尿嘧啶對Hela細(xì)胞的抑制作用及其機制的研究[D]. 王超萍.蘇州大學(xué) 2014
[3]卷葉黃精化學(xué)成分及其生物活性的研究[D]. 李娟麗.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2007



本文編號：3472760