目的:基于課題組前期實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)益肺散結(jié)方可減輕COPD小氣道重塑及延緩肺纖維化進(jìn)展的基礎(chǔ)上,本課題進(jìn)一步研究益肺散結(jié)方逐瘀作用的分子機(jī)制。本課題選取方中逐瘀藥莪術(shù)的主要成分姜黃素、莪術(shù)醇干預(yù)人肺成纖維細(xì)胞,觀察其對膠原合成及自噬水平的影響,探討其是否通過調(diào)控自噬干預(yù)人肺成纖維細(xì)胞膠原合成,從而闡述益肺散結(jié)方逐瘀作用的分子機(jī)制,為臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)和理論基礎(chǔ)參考。方法:體外培養(yǎng)人肺成纖維細(xì)胞（HLF）,以TGF-β1刺激成纖維細(xì)胞使之分化為肌成纖維細(xì)胞。不同濃度姜黃素、莪術(shù)醇為實(shí)驗(yàn)組。加入CQ的為抑制劑組。以雷帕霉素干預(yù)作為陽性對照組。為檢測膠原合成,使用消化法羥脯氨酸（HYP）檢測試劑盒檢測各組細(xì)胞的HYP含量;Q-PCR法檢測纖維化相關(guān)基因α-SMA表達(dá)水平;使用Western Blot檢測細(xì)胞內(nèi)Ⅰ型膠原蛋白（COL-Ⅰ）和Ⅲ型膠原蛋白（COL-Ⅲ）表達(dá)情況;使用Elisa法檢測Ⅰ型前膠原氨基端肽（PⅠNP）、III型前膠原氨基端肽（PIIINP）、人脯氨酸羥化酶（PHD）的含量。為檢測自噬水平,使用透射電鏡觀測自噬小體形成情況;Q-PCR法檢測自噬相關(guān)基因Beclin1、ATG 7... 

【文章來源】：云南中醫(yī)藥大學(xué)云南省

【文章頁數(shù)】：85 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

各組實(shí)驗(yàn)藥物干預(yù)后細(xì)胞活性變化情況

雷帕霉素組 16μg/mL 1.10±0.68#：與正常組比，*P＜0.05；與模型組相比，#P＜0.05。表 1-3 各組細(xì)胞培養(yǎng)液中羥脯氨酸含量（ X±SD，n=3，μg/mL）組別 濃度 羥脯氨酸含量正常組 — 0.43±0.006模型組 10ng/mL 4.09±0.001*姜黃素組8μg/mL 1.32±0.002#16μg/mL 0.89±0.016#32μg/mL 0.61±0.012#雷帕霉素組 16μg/mL 0.77±0.003#：與正常組比，*p＜0.05；與模型組相比，#p＜0.05。

雷帕霉素組 16μg/mL 1.10±0.68#：與正常組比，*P＜0.05；與模型組相比，#P＜0.05。表 1-3 各組細(xì)胞培養(yǎng)液中羥脯氨酸含量（ X±SD，n=3，μg/mL）組別 濃度 羥脯氨酸含量正常組 — 0.43±0.006模型組 10ng/mL 4.09±0.001*姜黃素組8μg/mL 1.32±0.002#16μg/mL 0.89±0.016#32μg/mL 0.61±0.012#雷帕霉素組 16μg/mL 0.77±0.003#：與正常組比，*p＜0.05；與模型組相比，#p＜0.05。

【參考文獻(xiàn)】：
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本文編號：3472230