研究目的動脈粥樣硬化（atherosclerosis,AS）是以動脈壁增厚、變硬和彈性減退為特征的動脈硬化性疾病。目前認為AS的形成過程是一種慢性炎癥反應,而血管內皮細胞炎性樣損傷是AS發(fā)生的始動環(huán)節(jié)。因此保護血管內皮細胞對于預防和治療AS及其相關疾病具有重要的臨床意義。流行病學和基礎研究均表明高同型半胱氨酸血癥（hyperhomocyst eine,HHCy）是血管內皮損傷獨立的危險因素,HHCy患者常伴有AS的發(fā)生。Diplacone是從毛泡桐果中提取的一種天然香葉烯基黃酮類化合物,具有很好的抗炎、抗菌、抗氧化的活性。本課題擬通過建立同型半胱氨酸（homocysteine,HCy）誘導人臍靜脈內皮細胞（human umbilical vein endothelial cell,HUVEC）炎性損傷模型,研究Diplacone對HCy誘導血管內皮細胞損傷的保護作用及其機制。研究方法1.HUVEC的培養(yǎng)HUVEC培養(yǎng)于含10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)液中,37℃、5%CO₂培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。細胞匯合致80%⁹0%,用含EDTA的0.25%的胰蛋白酶... 

【文章來源】：濟南大學山東省

【文章頁數】：81 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

Diplacone的分子結構式

將復蘇后的細胞置于倒置顯微鏡下進行觀察，細胞呈圓形透明狀個體，懸浮培養(yǎng)液中。細胞培養(yǎng) 24 h 后，細胞基本貼壁，將細胞換液后，可觀察細胞形狀呈短顏色透明。隨培養(yǎng)時間的增加，細胞數量也在持續(xù)增多，細胞呈短梭形或多角形鋪路石狀鑲嵌排列。待細胞生長至 80% 匯合（集或聚），細胞呈鋪路石狀緊密按 1：3 比例，將 HUVEC 進行傳代培養(yǎng)。之后隔天換液 1 次，每 3 d 左右進行 1 次將 HUVEC 傳至 2~3 代，此時正處于對數生長期，細胞活力旺盛，用于后續(xù)實驗選取一部分此時期的細胞凍存，長期儲存于液氮中，以備于后續(xù)實驗。由于細胞速度較快，需要不斷的進行傳代，經過觀察可知，當細胞傳至第十代后，細胞形由短梭形趨于長梭形（如圖 1.2），形狀逐漸趨于不規(guī)則，透明度下降，生長速度由于此時細胞狀態(tài)差，細胞衰老分化嚴重，不再適于后續(xù)實驗的進行，可以復蘇凍存的細胞，用于繼續(xù)后面的實驗。正常細胞 衰老分化細胞

比較均具有顯著統(tǒng)計學差異（P<0.01）。從圖 1.3 可以看出，開勢緩慢，而在 2 mmol/LHCy 處斜率最大，即遞減最快，之后趨mol/LHCy 為抑制 HUVEC 增殖的最適損傷濃度。結果詳見圖 1. HCy 損傷時間對 HUVEC 存活率的影響實驗結果表明，正常對照組的存活率為 100%，HUVEC 在經過 2 12 h、24 h、36 h 處理后，細胞存活率分別降為（89.50 ±10.26）%（56.60 ±6.59）%、（50.20 ±6.80）%、（45.70 ±7.96）%，與明顯的統(tǒng)計學差異（P<0.05）。存活率呈時間依賴性降低，且在率遞減最快，之后趨于平穩(wěn)。由此確定 12 h 為抑制 HUVEC 增殖詳見圖 1.4。

【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3470211