研究目的動(dòng)脈粥樣硬化（atherosclerosis,AS）是以動(dòng)脈壁增厚、變硬和彈性減退為特征的動(dòng)脈硬化性疾病。目前認(rèn)為AS的形成過(guò)程是一種慢性炎癥反應(yīng),而血管內(nèi)皮細(xì)胞炎性樣損傷是AS發(fā)生的始動(dòng)環(huán)節(jié)。因此保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞對(duì)于預(yù)防和治療AS及其相關(guān)疾病具有重要的臨床意義。流行病學(xué)和基礎(chǔ)研究均表明高同型半胱氨酸血癥（hyperhomocyst eine,HHCy）是血管內(nèi)皮損傷獨(dú)立的危險(xiǎn)因素,HHCy患者常伴有AS的發(fā)生。Diplacone是從毛泡桐果中提取的一種天然香葉烯基黃酮類化合物,具有很好的抗炎、抗菌、抗氧化的活性。本課題擬通過(guò)建立同型半胱氨酸（homocysteine,HCy）誘導(dǎo)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（human umbilical vein endothelial cell,HUVEC）炎性損傷模型,研究Diplacone對(duì)HCy誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷的保護(hù)作用及其機(jī)制。研究方法1.HUVEC的培養(yǎng)HUVEC培養(yǎng)于含10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)液中,37℃、5%CO₂培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。細(xì)胞匯合致80%⁹0%,用含EDTA的0.25%的胰蛋白酶... 

【文章來(lái)源】：濟(jì)南大學(xué)山東省

【文章頁(yè)數(shù)】：81 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

Diplacone的分子結(jié)構(gòu)式

將復(fù)蘇后的細(xì)胞置于倒置顯微鏡下進(jìn)行觀察，細(xì)胞呈圓形透明狀個(gè)體，懸浮培養(yǎng)液中。細(xì)胞培養(yǎng) 24 h 后，細(xì)胞基本貼壁，將細(xì)胞換液后，可觀察細(xì)胞形狀呈短顏色透明。隨培養(yǎng)時(shí)間的增加，細(xì)胞數(shù)量也在持續(xù)增多，細(xì)胞呈短梭形或多角形鋪路石狀鑲嵌排列。待細(xì)胞生長(zhǎng)至 80% 匯合（集或聚），細(xì)胞呈鋪路石狀緊密按 1：3 比例，將 HUVEC 進(jìn)行傳代培養(yǎng)。之后隔天換液 1 次，每 3 d 左右進(jìn)行 1 次將 HUVEC 傳至 2~3 代，此時(shí)正處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，細(xì)胞活力旺盛，用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)選取一部分此時(shí)期的細(xì)胞凍存，長(zhǎng)期儲(chǔ)存于液氮中，以備于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。由于細(xì)胞速度較快，需要不斷的進(jìn)行傳代，經(jīng)過(guò)觀察可知，當(dāng)細(xì)胞傳至第十代后，細(xì)胞形由短梭形趨于長(zhǎng)梭形（如圖 1.2），形狀逐漸趨于不規(guī)則，透明度下降，生長(zhǎng)速度由于此時(shí)細(xì)胞狀態(tài)差，細(xì)胞衰老分化嚴(yán)重，不再適于后續(xù)實(shí)驗(yàn)的進(jìn)行，可以復(fù)蘇凍存的細(xì)胞，用于繼續(xù)后面的實(shí)驗(yàn)。正常細(xì)胞 衰老分化細(xì)胞

比較均具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.01）。從圖 1.3 可以看出，開勢(shì)緩慢，而在 2 mmol/LHCy 處斜率最大，即遞減最快，之后趨mol/LHCy 為抑制 HUVEC 增殖的最適損傷濃度。結(jié)果詳見圖 1. HCy 損傷時(shí)間對(duì) HUVEC 存活率的影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，正常對(duì)照組的存活率為 100%，HUVEC 在經(jīng)過(guò) 2 12 h、24 h、36 h 處理后，細(xì)胞存活率分別降為（89.50 ±10.26）%（56.60 ±6.59）%、（50.20 ±6.80）%、（45.70 ±7.96）%，與明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）。存活率呈時(shí)間依賴性降低，且在率遞減最快，之后趨于平穩(wěn)。由此確定 12 h 為抑制 HUVEC 增殖詳見圖 1.4。

【參考文獻(xiàn)】：
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