發(fā)布時間：2021-10-29 19:57

　　研究目的本論文旨在對貓爪草粗多糖進(jìn)行系統(tǒng)的分離,以期得到的貓爪草多糖組分、多糖亞組分和均一多糖成分,并對分離產(chǎn)物進(jìn)行理化性質(zhì)的測定,同時采用體內(nèi)和體外模型,評價貓爪草粗多糖、多糖組分、多糖亞組分和均一多糖成分的抗肝損傷和免疫調(diào)節(jié)活性,為今后貓爪草多糖的研究和開發(fā)提供實驗依據(jù),以及為“靈貓方”的開發(fā)奠定基礎(chǔ)。實驗方法實驗中采用水浴提取/煎煮、醇沉、透析和冷凍干燥等方法,制備貓爪草粗多糖;采用DEAE-纖維素、Sephadex G-100和Sephadex G-50柱層析對粗多糖進(jìn)行系統(tǒng)的分離和純化;通過測定糖醛酸含量、糖含量、分子量分布和單糖組成,確定粗多糖、多糖亞組分和均一多糖成分的理化性質(zhì);采用紅外光譜和核磁共振圖譜對均一多糖成分進(jìn)行化學(xué)結(jié)構(gòu)的表征。采用ConA誘導(dǎo)肝損傷模型,評價貓爪草多糖對整體動物的保肝活性;采用人L-O₂細(xì)胞評價多糖在體外促進(jìn)肝細(xì)胞增殖和對抗ConA或H₂O₂誘導(dǎo)的肝細(xì)胞損傷的活性;采用HepG2.2.15肝細(xì)胞評價貓爪草多糖對乙肝抗原分泌的抑制活性;采用小鼠原代脾細(xì)胞評價多糖對脾細(xì)胞增殖和分泌細(xì)... 

【文章來源】：湖南中醫(yī)藥大學(xué)湖南省

【文章頁數(shù)】：97 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
ABSTRACT
中英文縮略表
引言
第一章 貓爪草多糖提取、分離和純化及理化表征的分析
    1 材料
        1.1 藥材
        1.2 試劑
        1.3 儀器
    2 實驗方法
        2.1 貓爪草粗多糖的制備
        2.2 貓爪草粗多糖的分離和純化
            2.2.1 貓爪草粗多糖的DEAE-Cellulose柱層析
            2.2.2 貓爪草多糖組分的初次凝膠柱層析
            2.2.3 貓爪草多糖亞組分的再次凝膠柱層析
        2.3 貓爪草多糖理化性質(zhì)的測定
            2.3.1 糖含量測定
            2.3.2 糖醛酸含量測定
            2.3.3 多糖分子量的分布和峰高分子量測定
            2.3.4 多糖組分單糖組成測定
    3. 實驗結(jié)果
        3.1 貓爪草粗多糖的理化性質(zhì)
        3.2 貓爪草多糖組分的理化性質(zhì)
        3.3 貓爪草多糖亞組分的理化性質(zhì)
        3.4 貓爪草均一多糖成分RTP-60-Ⅰ和RTP-60-Ⅱ的理化性質(zhì)
    4.小結(jié)
第二章 貓爪草多糖抗肝損傷和免疫調(diào)節(jié)作用的研究
    1.實驗材料
        1.1 動物和細(xì)胞
        1.2 試劑和供試品
        1.3 儀器
    2.實驗方法
        2.1 ConA誘導(dǎo)小鼠肝損傷模型的建立
        2.2 ConA致肝損傷小鼠藥理活性指標(biāo)的測定方法
            2.2.1 小鼠脾臟細(xì)胞增殖能力檢測的實驗方法
            2.2.2 檢測小鼠脾臟細(xì)胞分泌IFN-γ和IL-6 能力的實驗方法
            2.2.3 檢測肝臟勻漿上清液中總蛋白的含量
            2.2.4 檢測肝臟勻漿上清液中超氧化物歧化酶(SOD)的活力
            2.2.5 檢測肝臟勻漿上清液中過氧化氫酶(CAT)的活力
            2.2.6 檢測肝臟勻漿上清液中丙二醛(MDA)的活力
            2.2.7 檢測肝臟勻漿上清液中TNF-α的含量
            2.2.8 檢測肝臟勻漿上清液中IFN-γ的含量
            2.2.9 檢測肝臟勻漿上清液中IL-6 的含量
            2.2.10 檢測肝臟勻漿上清液中谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)的活力
            2.2.11 檢測肝臟勻漿上清液中谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)的活力
        2.3 體外測定多糖對人肝細(xì)胞分泌HBsAg和HBeAg影響的方法
        2.4 體外測定多糖對人L-O_2肝細(xì)胞增殖活性的實驗
        2.5 測定多糖對人L-O_2肝細(xì)胞抗ConA損傷影響的實驗方法
        2.6 體外測定多糖對人L-O_2肝細(xì)胞抗H_2O_2損傷影響的實驗方法
        2.7 體外測定多糖免疫活性方法
            2.7.1 檢測多糖對小鼠脾臟B和T淋巴細(xì)胞增殖能力影響
            2.7.2 檢測多糖對小鼠脾細(xì)胞分泌IFN-γ的影響
            2.7.3 檢測腹腔巨噬細(xì)胞分泌TNF-α影響
        2.8 統(tǒng)計學(xué)方法
    3.實驗結(jié)果
        3.1 貓爪草粗多糖對ConA誘導(dǎo)肝損傷小鼠影響的實驗結(jié)果
            3.1.1 對ConA造模小鼠存活率的影響
            3.1.2 貓爪草粗多糖對ConA肝損傷小鼠臟器質(zhì)量的影響
            3.1.3 粗多糖對ConA誘導(dǎo)肝損傷小鼠肝組織病理變化的影響
            3.1.4 對肝損傷小鼠脾細(xì)胞增殖以及IFN-γ和IL-6 分泌的影響
            3.1.5 對肝損傷小鼠肝勻漿中SOD、MDA及CAT含量的影響
            3.1.6 對肝損傷小鼠肝勻漿中IFN-γ、TNF-α、IL-6 含量的影響
            3.1.7 對肝損傷小鼠肝勻漿中AST和ALT活力的影響
        3.2 粗多糖對HepG2.2.15 肝細(xì)胞分泌HBsAg和HBeAg的影響
        3.3 貓爪草多糖對人L-O_2細(xì)胞的促增殖和抗ConA損傷的影響
            3.3.1 粗多糖對人L-O_2細(xì)胞的促增殖和抗ConA損傷的影響
            3.3.2 多糖組分對人L-O_2細(xì)胞的促增殖和抗ConA損傷的影響
            3.3.3 多糖亞組分對人L-O_2細(xì)胞的促增殖和抗ConA損傷的影響
            3.3.4 均一多糖對人L-O_2細(xì)胞的促增殖和抗ConA損傷的影響
        3.4 貓爪草多糖對人L-O_2 細(xì)胞抗H_2O_2損傷的影響
            3.4.1 粗多糖對人L-O_2 細(xì)胞的抗H_2O_2損傷的影響
            3.4.2 多糖組分對人L-O_2細(xì)胞的抗H_2O_2損傷的影響
            3.4.3 亞組分對人L-O_2 細(xì)胞的抗H_2O_2損傷的影響
            3.4.4 均一多糖對人L-O_2細(xì)胞的抗H_2O_2損傷的影響
        3.5 貓爪草粗多糖免疫活性的研究結(jié)果(體外)
            3.5.1 對原代小鼠脾臟淋巴細(xì)胞增殖的影響
            3.5.2 貓爪草粗多糖對脾細(xì)胞分泌IFN-γ的影響
            3.5.3 貓爪草粗多糖對腹腔巨噬細(xì)胞分泌TNF-α的影響
        3.6 貓爪草多糖組分免疫活性的研究結(jié)果(體外)
            3.6.1 貓爪草多糖組分對原代小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖的影響
            3.6.2 貓爪草多糖組分對脾細(xì)胞分泌IFN-γ的影響
    4.小結(jié)
第三章 貓爪草多糖成分的化學(xué)結(jié)構(gòu)解析
    1 材料
        1.1 試劑
        1.2 儀器
    2 實驗方法
        2.1 紅外光譜(IR)測定
        2.2 核磁共振(NMR)圖譜測定
    3.實驗結(jié)果
        3.1 RTP-60-Ⅰ結(jié)構(gòu)解析
            3.1.1 紅外光譜(IR)分析
            3.1.2 核磁共振吸收光譜解析(NMR)
        3.2 RTP-60-Ⅱ結(jié)構(gòu)解析
            3.2.1 紅外光譜(IR)分析
            3.2.2 核磁共振吸收光譜解析(NMR)
    4. 小結(jié)
結(jié)論
致謝
參考文獻(xiàn)


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
[1]中藥貓爪草的化學(xué)成分分析研究[D]. 芮晟.南京工業(yè)大學(xué) 2003



本文編號：3465302