人表皮生長因子（human Epidermal growth factor,hEGF）被廣泛應(yīng)用于皮膚創(chuàng)傷修復(fù)。然而,其穩(wěn)定性差、透皮吸收效果不佳等缺點(diǎn)嚴(yán)重限制了其在臨床中的應(yīng)用。因此該課題針對(duì)hEGF的臨床應(yīng)用限制,將hEGF基因與油體蛋白基因oleosin相融合,構(gòu)建了pOTB-oleosin-hEGF表達(dá)載體,且在紅花種子中表達(dá)oleosin-hEGF融合蛋白。Oleosin-hEGF融合蛋白的表達(dá)可以克服天然hEGF的不足,使其能夠在體外穩(wěn)定儲(chǔ)存,為后續(xù)更好的開發(fā)利用hEGF奠定了基礎(chǔ)。T3代轉(zhuǎn)基因紅花種子播種后,待長出4-6片新鮮嫩葉,采摘新鮮葉片0.2g,對(duì)其基因組進(jìn)行PCR檢測(cè);待紅花種子成熟后,從種子中提取目的蛋白。利用SDS-PAGE和Western blot來鑒定轉(zhuǎn)基因紅花種子中是否能成功表達(dá)出目的蛋白o(hù)leosin-hEGF,通過Quantity One軟件對(duì)各株系表達(dá)的oleosin-hEGF蛋白進(jìn)行半定量分析。隨后制備小鼠在體透皮吸收實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?通過病理切片和蛋白免疫雜交實(shí)驗(yàn)來評(píng)估oleosin-hEGF融合蛋白的透皮吸收效果。利用MTT法檢測(cè)oleosin-h... 

【文章來源】：吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)吉林省

【文章頁數(shù)】：76 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
前言
第一篇 文獻(xiàn)綜述
    第一章 表皮生長因子(EGF)的研究進(jìn)展
        1.1 EGF簡介
        1.2 EGF的基因構(gòu)成
        1.3 EGF的產(chǎn)生
        1.4 EGF的作用機(jī)制
        1.5 EGF生物學(xué)功能
        1.6 EGF在臨床中的作用
    第二章 油體反應(yīng)器的研究進(jìn)展
        2.1 油體概述
        2.2 油體生物反應(yīng)器的特點(diǎn)
        2.3 油體反應(yīng)器的研究進(jìn)展
第二篇 研究內(nèi)容
    第一章 轉(zhuǎn)hEGF紅花的篩選及鑒定
        引言
        1.1 實(shí)驗(yàn)材料和試劑
        1.2 實(shí)驗(yàn)方法
        1.3 結(jié)果與分析
        1.4 討論
        1.5 小結(jié)
    第二章 oleosin-hEGF對(duì) NIH/3T3 細(xì)胞的促增殖活性分析
        引言
        2.1 材料與試劑
        2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.3 結(jié)果與分析
        2.4 討論
        2.5 小結(jié)
    第三章 紅花油體表達(dá)的oleosin-hEGF透皮吸收考察
        引言
        3.1 材料與試劑
        3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.3 結(jié)果與分析
        3.4 討論
        3.5 小結(jié)
    第四章 紅花油體表達(dá)的oleosin-hEGF促大鼠皮膚創(chuàng)傷修復(fù)的藥效學(xué)研究
        引言
        4.1 材料與試劑
        4.2 實(shí)驗(yàn)方法
        4.3 結(jié)果與分析
        4.4 討論
        4.5 小結(jié)
    第五章 Oleosin-hEGF對(duì)皮膚創(chuàng)傷修復(fù)過程中內(nèi)源性TGF-β_1、bFGF、VEGF的影響
        引言
        5.1 材料與試劑
        5.2 實(shí)驗(yàn)方法
        5.3 結(jié)果與分析
        5.4 討論
        5.5 小結(jié)
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
作者簡介
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Therapeutic resistance in cancer: microRNA regulation of EGFR signaling networks[J]. German G.Gomez,Jill Wykosky,Ciro Zanca,Frank B.Furnari,Webster K.Cavenee.  Cancer Biology & Medicine. 2013(04)
[2]以油體作為生物反應(yīng)器的研究進(jìn)展[J]. 趙傳志,盧金東,蘇磊,畢玉平,王興軍.  生物技術(shù)通報(bào). 2008(02)
[3]VEGF、bFGF和TGF-β1在大鼠馬兜鈴酸腎損傷中的表達(dá)[J]. 黃雯,陳薇.  首都醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào). 2006(05)
[4]中性粒細(xì)胞在組織修復(fù)中的作用[J]. 陳曉紅,程天民.  中國藥理學(xué)通報(bào). 2001(04)



本文編號(hào)：3434632