發(fā)布時間：2021-10-13 04:42

　　第一部分HSV-2感染VK₂/E6E7細(xì)胞模型穩(wěn)定性相關(guān)參數(shù)的完善【目的】前期課題組已構(gòu)建相對穩(wěn)定的體外HSV-2病毒感染VK₂/E6E7細(xì)胞模型,但在后期實(shí)驗(yàn)中,發(fā)現(xiàn)此模型尚有不足之處,為了實(shí)驗(yàn)的順利進(jìn)行,故對該模型相關(guān)參數(shù)進(jìn)行進(jìn)一步的完善�！痉椒ā坑蒝ero細(xì)胞擴(kuò)增HSV-2,利用半數(shù)致組織或細(xì)胞病變（TCID50）方法測定收獲的HSV-2的毒力,平均每周測定一次,連續(xù)測定9周（HSV-2于4℃冰箱中保存）。將收獲的于Vero細(xì)胞上擴(kuò)增的HSV-2在Vero細(xì)胞上再次擴(kuò)增,且進(jìn)行病毒濃縮;觀察Vero細(xì)胞的病變效應(yīng)（CPE）,選擇合理時機(jī)收獲;將收獲的HSV-2稀釋5倍、10倍、20倍,與96孔板中的VK₂/E6E7細(xì)胞共孵育24h,以MTT方法測定VK₂/E6E7細(xì)胞的存活率,評估HSV-2的毒力。選取狀態(tài)較好的VK₂/E6E7細(xì)胞,即細(xì)胞呈梭形,如鋪路石樣且胞質(zhì)豐富、細(xì)胞體積大、細(xì)胞膜、細(xì)胞核輪廓清晰,進(jìn)行培養(yǎng),將HSV-2原液稀釋10倍加入已接種此狀態(tài)的VK_... 

【文章來源】：華中科技大學(xué)湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：80 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

HSV-2在4℃保存的毒力衰減曲線

圖 1 HSV-2 在 4℃保存的毒力衰減曲線注：此圖縱坐標(biāo)（Y 值）以 lgTCID50 表示，即 TCID50 的 10 的根數(shù)。由圖 1 可推斷，在第 0 周—第 4 周，TCID50 逐漸降低；在第 4 周—第 7w，出現(xiàn)平臺期；第 7 周—第 9 周，又大概以先前的速率下降。2.采用濃縮方法擴(kuò)增在 Vero 細(xì)胞上擴(kuò)增 HSV-22.1 HSV-2 感染 Vero 細(xì)胞的形態(tài)學(xué)

圖 3 濃縮方法收獲的 HSV-2 毒力測定**：與正常組相比有統(tǒng)計學(xué)差異，P〈0.001.可知，HSV-2 稀釋 5 倍、10 倍、20 倍組與正常組（C）相比，異，P〈0.001，其存活率分別為：稀釋 5 倍組：43.5% 1.4% 1.1%；稀釋 20 倍組：48.2% 1.8%。V-2 在不同狀態(tài) VK2/E6E7 細(xì)胞復(fù)壯2/E6E7 細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察

【參考文獻(xiàn)】：
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