目的:以小鼠海馬細胞系HT-22為研究對象,在Aβ25-35誘導下,體外觀察異水飛薊賓對NRF2/ARE信號通路的影響。方法:使用MTT法檢測異水飛薊賓對HT-22細胞時間劑量毒性以及Aβ25-35對HT-22細胞時間劑量毒性。在無毒性劑量范圍內(nèi),MTT法檢測異水飛薊賓緩解Aβ25-35的有效劑量范圍和最佳作用時間。檢測在異水飛薊賓對Aβ25-35誘導的MDA,LDH細胞損傷指標的影響。檢測在異水飛薊賓對Aβ25-35誘導的T-AOC細胞抗氧化指標的影響。檢測在異水飛薊賓對Aβ25-35誘導的HT-22細胞內(nèi)源性ROS水平的影響,并應(yīng)用ROS特異性抑制劑NAC驗證ROS同細胞氧化損傷之間的關(guān)系。Western blotting檢測異水飛薊賓及Aβ25-35對HT-22細胞的HO-1,AKR1C2,GST蛋白表達的影響,qPCR檢測異水飛薊賓及Aβ25-35對HT-22細胞的HO-1,AKR1C2,GST mRNA表達的影響。構(gòu)建ARE熒光素酶報告質(zhì)粒pG3L-ARE,將其轉(zhuǎn)染到HT-22細胞中,檢測異水飛薊賓或NRF2特異性激動劑t-BHQ對pG3L-ARE報告基因表達活性熒光強度的影... 

【文章來源】：皖南醫(yī)學院安徽省

【文章頁數(shù)】：55 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

水飛薊素中主要的活性成分的化學分結(jié)構(gòu)

皖南醫(yī)學院碩士學位論文結(jié) 果水飛薊賓緩解 Aβ25-35誘導的 HT-22 細胞活力值下降為了驗證異水飛薊賓對 HT-22 細胞的是否有毒性，使用一系列不同濃度的異水飛薊賓.1,0.5,1,2,4,8,10,20,50 μM)孵育 HT-22 細胞 24 h，MTT 法檢測不同濃度的異水飛薊賓對-22 細胞活力值的影響，實驗結(jié)果如圖 2.1 所示，當異水飛薊賓濃度大于 20 μM時會對 H2產(chǎn)生細胞毒性。

HT-22 細胞活力值的影響，實驗結(jié)果如圖 2.1 所示，當異水飛薊賓濃度大于 20 μM時會對 HT-22產(chǎn)生細胞毒性。圖 2.1 不同濃度異水飛薊賓對 HT-22 細胞活力的影響(*p<0.05, **p<0.01)為了驗證異水飛薊賓毒性產(chǎn)生的時間，使用的 10 μM 異水飛薊賓分別孵育 HT-22 細胞0,6,12,24,36,48,60,72 h，MTT 法檢測不同濃度的異水飛薊賓對 HT-22 細胞活力值的影響，實驗結(jié)果如圖 2.2 所示，10 μM 的異水飛薊賓孵育 72 h 內(nèi)對 HT-22 細胞都沒有產(chǎn)生細胞毒性。因此異水飛薊賓的安全劑量濃度為 10 μM。

【參考文獻】：
期刊論文
[1]淀粉樣β蛋白沉淀及其神經(jīng)毒性與阿爾茨海默病[J]. 許志強,周華東,蔣曉江.  中國臨床康復(fù). 2006(14)



本文編號：3399542