目的:以小鼠海馬細(xì)胞系HT-22為研究對(duì)象,在Aβ25-35誘導(dǎo)下,體外觀察異水飛薊賓對(duì)NRF2/ARE信號(hào)通路的影響。方法:使用MTT法檢測(cè)異水飛薊賓對(duì)HT-22細(xì)胞時(shí)間劑量毒性以及Aβ25-35對(duì)HT-22細(xì)胞時(shí)間劑量毒性。在無(wú)毒性劑量范圍內(nèi),MTT法檢測(cè)異水飛薊賓緩解Aβ25-35的有效劑量范圍和最佳作用時(shí)間。檢測(cè)在異水飛薊賓對(duì)Aβ25-35誘導(dǎo)的MDA,LDH細(xì)胞損傷指標(biāo)的影響。檢測(cè)在異水飛薊賓對(duì)Aβ25-35誘導(dǎo)的T-AOC細(xì)胞抗氧化指標(biāo)的影響。檢測(cè)在異水飛薊賓對(duì)Aβ25-35誘導(dǎo)的HT-22細(xì)胞內(nèi)源性ROS水平的影響,并應(yīng)用ROS特異性抑制劑NAC驗(yàn)證ROS同細(xì)胞氧化損傷之間的關(guān)系。Western blotting檢測(cè)異水飛薊賓及Aβ25-35對(duì)HT-22細(xì)胞的HO-1,AKR1C2,GST蛋白表達(dá)的影響,qPCR檢測(cè)異水飛薊賓及Aβ25-35對(duì)HT-22細(xì)胞的HO-1,AKR1C2,GST mRNA表達(dá)的影響。構(gòu)建ARE熒光素酶報(bào)告質(zhì)粒pG3L-ARE,將其轉(zhuǎn)染到HT-22細(xì)胞中,檢測(cè)異水飛薊賓或NRF2特異性激動(dòng)劑t-BHQ對(duì)pG3L-ARE報(bào)告基因表達(dá)活性熒光強(qiáng)度的影... 

【文章來(lái)源】：皖南醫(yī)學(xué)院安徽省

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

水飛薊素中主要的活性成分的化學(xué)分結(jié)構(gòu)

皖南醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文結(jié) 果水飛薊賓緩解 Aβ25-35誘導(dǎo)的 HT-22 細(xì)胞活力值下降為了驗(yàn)證異水飛薊賓對(duì) HT-22 細(xì)胞的是否有毒性，使用一系列不同濃度的異水飛薊賓.1,0.5,1,2,4,8,10,20,50 μM)孵育 HT-22 細(xì)胞 24 h，MTT 法檢測(cè)不同濃度的異水飛薊賓對(duì)-22 細(xì)胞活力值的影響，實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖 2.1 所示，當(dāng)異水飛薊賓濃度大于 20 μM時(shí)會(huì)對(duì) H2產(chǎn)生細(xì)胞毒性。

HT-22 細(xì)胞活力值的影響，實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖 2.1 所示，當(dāng)異水飛薊賓濃度大于 20 μM時(shí)會(huì)對(duì) HT-22產(chǎn)生細(xì)胞毒性。圖 2.1 不同濃度異水飛薊賓對(duì) HT-22 細(xì)胞活力的影響(*p<0.05, **p<0.01)為了驗(yàn)證異水飛薊賓毒性產(chǎn)生的時(shí)間，使用的 10 μM 異水飛薊賓分別孵育 HT-22 細(xì)胞0,6,12,24,36,48,60,72 h，MTT 法檢測(cè)不同濃度的異水飛薊賓對(duì) HT-22 細(xì)胞活力值的影響，實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖 2.2 所示，10 μM 的異水飛薊賓孵育 72 h 內(nèi)對(duì) HT-22 細(xì)胞都沒(méi)有產(chǎn)生細(xì)胞毒性。因此異水飛薊賓的安全劑量濃度為 10 μM。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]淀粉樣β蛋白沉淀及其神經(jīng)毒性與阿爾茨海默病[J]. 許志強(qiáng),周華東,蔣曉江.  中國(guó)臨床康復(fù). 2006(14)



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