發(fā)布時(shí)間：2021-09-04 23:37

　　目的:原發(fā)性肝癌是一種惡性腫瘤,在我國比較常見,在消化系統(tǒng)惡性腫瘤中原發(fā)性肝癌的死亡率居于第3位,每年我國死于肝癌的患者大約11萬人,中國原發(fā)性肝癌的死亡人數(shù)占世界范圍內(nèi)的45%。手術(shù)切除是治療肝癌的主要方式,目前沒有針對(duì)性的治療藥物。中藥單體化合物土槿皮乙酸（Pseudolaric Acid B,PAB）是從土槿皮中分離獲得的一種新型二萜酸。有研究證明PAB具有抗微管、抗血管生成、抗腫瘤等藥理作用。本實(shí)驗(yàn)對(duì)其抗肝癌作用及作用機(jī)制進(jìn)行了分析。方法:MTT法確定土槿皮乙酸是否具有抑制腫瘤細(xì)胞增殖的能力;熒光染色法檢測(cè)土槿皮乙酸處理后SMMC7721細(xì)胞微管聚集情況;土槿皮乙酸處理后的肝癌細(xì)胞SMMC7721轉(zhuǎn)移的情況用劃痕法來確定;土槿皮乙酸誘導(dǎo)的細(xì)胞死亡通過細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化確定;DNA瓊脂糖凝膠電泳確定土槿皮乙酸是否誘導(dǎo)SMMC7721細(xì)胞凋亡的發(fā)生;流式細(xì)胞儀檢測(cè)土槿皮乙酸對(duì)細(xì)胞周期的影響;土槿皮乙酸對(duì)基因CyclinB1和CDK1的轉(zhuǎn)錄的影響用Real-time PCR檢測(cè);細(xì)胞凋亡和周期相關(guān)蛋白的表達(dá)應(yīng)用Western blot方法檢測(cè),通過如上方法確定土槿皮乙酸誘導(dǎo)... 

【文章來源】：長春中醫(yī)藥大學(xué)吉林省

【文章頁數(shù)】：72 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

凋亡細(xì)胞的DNA變化

圖 3 Caspase 激活通路圖當(dāng)下游的 Caspase 在活化后會(huì)執(zhí)行相應(yīng)的功能（Table 1-1）。研究發(fā)現(xiàn) Caspase 的底可以分為四類：第一類，被激活的底物，例如 Caspase 本身，還有被 Caspase 激活的NA 酶（CAD）。第二類，被失活的底物，例如 DNA 蛋白激酶（DNA-PK），還有視網(wǎng)神經(jīng)膠質(zhì)瘤的抑制蛋白。第三類，一些結(jié)構(gòu)蛋白，結(jié)構(gòu)蛋白的聚集或解聚被 Caspase 蛋的切割影響，例如，A-型核層蛋白和 B-型核層蛋白（lamins）。第四類，明確了 Caspase白對(duì)底物的切斷作用，但具體后果不清楚。Table. 1-1 Human Caspase SuperfamilyProteases Alternative Names Sequence SubstratesCaspase-1 ICE YVAD pro-IL1 , pro-Caspase 3 and4Caspase-2 ICH-1 DXXD PARPCaspase-3 CPP32, Yama,DEXD PARP, DNA-PK, SRE/BP,

圖 4 細(xì)胞周期的概述Overview of the eukaryotic cell cycle在 G1期內(nèi)，為了合成 DNA，細(xì)胞會(huì)準(zhǔn)備 DNA 合成所需要的蛋白質(zhì)及 mRNA 等物質(zhì)，進(jìn)而為 DNA 的復(fù)制做好準(zhǔn)備。研究發(fā)現(xiàn)，細(xì)胞周期的第一個(gè)細(xì)胞周期檢驗(yàn)點(diǎn)位于G1/S 期交界處，當(dāng)生長因子刺激信號(hào)持續(xù)存在的時(shí)候，細(xì)胞可以躍過這個(gè)檢驗(yàn)，順利進(jìn)入到 S 期，但如果檢查到異常情況，細(xì)胞周期將會(huì)停止，不會(huì)進(jìn)行 DNA 復(fù)制，所以 G1/期檢查點(diǎn)保證了 S 期進(jìn)入的準(zhǔn)確性。在 S 期內(nèi)，細(xì)胞會(huì)進(jìn)行 DNA 的合成和基因組的復(fù)制，這個(gè)過程極易引起突變的進(jìn)入，所以 S 期較短。但是當(dāng)細(xì)胞進(jìn)入到 S 期后，則無論是否發(fā)生 DNA 損傷且還是是否缺少生長因子刺激信號(hào)，DNA 的復(fù)制都會(huì)完成，所以 期的不恰當(dāng)進(jìn)入導(dǎo)致了基因突變、缺失、插入的存在。DNA 復(fù)制后，細(xì)胞周期會(huì)從 期進(jìn)入 G2期，在 G2 期準(zhǔn)備了有絲分裂和細(xì)胞分裂的物質(zhì)和原料。在進(jìn)行有絲分裂前細(xì)胞會(huì)檢查 DNA 復(fù)制是否正確，是有累積了過多的 DNA 損傷，這些工作在細(xì)胞周期的 G期完成，如有 DNA 損傷，則進(jìn)行修復(fù)，如果修復(fù)無法完成則細(xì)胞死亡。然后，如

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Cell cycle regulation and anticancer drug discovery[J]. Jingwen Bai,Yaochen Li,Guojun Zhang.  Cancer Biology & Medicine. 2017(04)
[2]中藥治療肝癌機(jī)制的研究進(jìn)展[J]. 賀珊,廖長秀.  中成藥. 2017(01)
[3]羥基紅花黃色素A抑制異常增殖血管內(nèi)皮細(xì)胞的機(jī)制研究[J]. 王熙熙,王景景,王旭,范盎然,于雪,胡京紅,解華,徐瑩瑩,劉麗,臧寶霞,張前.  北京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào). 2016(08)
[4]蛇床子素抑制膀胱癌細(xì)胞生長和侵襲的機(jī)制[J]. 劉軍,徐冉,趙曉昆.  中南大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版). 2016(04)
[5]細(xì)胞周期與腫瘤轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)[J]. 詹啟敏,陳杰.  中國腫瘤臨床. 2014(01)
[6]復(fù)方中藥對(duì)小鼠肺癌細(xì)胞凋亡的影響[J]. 梁朝暉,潘智然,李娟.  世界中西醫(yī)結(jié)合雜志. 2008(11)
[7]西黃丸對(duì)肝癌細(xì)胞SMMC7721分泌的血管內(nèi)皮生長因子及基質(zhì)金屬蛋白酶2、9的影響[J]. 金沈銳,張新勝,祝彼得,秦旭華.  中成藥. 2008(07)
[8]中藥“松友飲”對(duì)高轉(zhuǎn)移人肝癌侵襲性及小鼠免疫功能的影響[J]. 黃修燕,黃自麗,晁愚,王魯,周儉,葉勝龍,湯釗猷.  腫瘤. 2008(06)
[9]清開靈注射液對(duì)HepG2細(xì)胞u-PAR表達(dá)影響的實(shí)驗(yàn)研究[J]. 王文花,單澤松,胡海燕,張曉艷.  中華中醫(yī)藥學(xué)刊. 2008(06)
[10]康萊特注射液抗惡性腫瘤肝轉(zhuǎn)移療效及機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究[J]. 黃挺,陳震,楊雪飛,李勇,張志娣,黃伶,張建剛,張曉麗.  中國現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué). 2008(01)



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