目的:腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中,粒細胞樣髓源抑制性細胞（granulocytic myeloid-derived suppressor cells,G-MDSCs）大量擴增并抑制機體的抗腫瘤免疫應答。白藜蘆醇（resveratrol,RES）是一種具有多種生物學活性的天然植物抗毒素,其可通過多種機制防治腫瘤,但對G-MDSCs的作用尚不明確。本論文體內(nèi)利用小鼠Lewis肺癌細胞構(gòu)建皮下移植瘤模型,探討白藜蘆醇能否通過抑制G-MDSCs的擴增來延緩腫瘤的生長;體外將白藜蘆醇作用于荷瘤小鼠脾臟G-MDSCs,檢測G-MDSCs凋亡及向腫瘤組織募集的情況,同時觀察其免疫抑制功能的變化,并探討STAT3信號通路在其中發(fā)揮的作用。方法:（1）用Lewis細胞皮下注射C57BL/6小鼠建立肺癌移植瘤模型,荷瘤小鼠隨機分成兩組,分別用PBS和白藜蘆醇連續(xù)灌胃處理3周。測量小鼠皮下腫瘤體積和重量,實時監(jiān)測腫瘤生長情況和小鼠生存率;采用流式細胞術(shù)（FCM）檢測各組小鼠脾臟和腫瘤中總MDSCs、G-MDSCs、M-MDSCs、CD8+T細胞比率,以及小鼠引流淋巴結(jié)中CD8+T細胞比率。（2）體外通過免疫磁珠分選... 

【文章來源】：江蘇大學江蘇省

【文章頁數(shù)】：76 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

骨髓細胞在正常條件和腫瘤誘導條件下的分化過程

的穩(wěn)定性和生物利用度。白藜蘆醇的化學結(jié)構(gòu)導致其在水中的溶解度較低，因而其吸收率也較低[58]。通過靜脈注射進入體內(nèi)的白藜蘆醇在血漿中將會以與脂蛋白和清蛋白結(jié)合的方式進入細胞而發(fā)揮作用。通過口服進入動物和人體內(nèi)的白藜蘆醇，70%-80%在腸道通過被動擴散被吸收，后與硫酸鹽和葡萄糖醛酸結(jié)合，30-60 分鐘后反式白藜蘆醇在循環(huán)系統(tǒng)中的水平將會達到峰值，但其很快在肝臟被代謝。研究證明，白藜蘆醇在體內(nèi)的生物利用度不高，其在肝臟和小腸的代謝產(chǎn)物僅有1%被利用[59]。白藜蘆醇在體內(nèi)主要代謝為白藜蘆醇-3-O-硫酸酯/葡糖苷酸和白藜蘆醇-4′-O-硫酸酯/葡糖苷酸等，這些代謝產(chǎn)物在血漿和尿液中的濃度約是天然白藜蘆醇的 20倍[60]。另外，有學者發(fā)現(xiàn)來自紅酒和葡萄果汁中的白藜蘆醇，其生物利用度要明顯高于來自藥片或其他食品中的白藜蘆醇[61]。由于白藜蘆醇在體內(nèi)的吸收和利用度都相對較低，因此未來要更多地著手于研究提高其吸收率和利用率的方法，以便更好地分析白藜蘆醇在機體內(nèi)的生物學作用。

細胞培養(yǎng)技術(shù)，細胞凋亡檢測技術(shù)（Annexin-V/7-AAD），免疫磁珠分選（MACS），蛋白質(zhì)免疫印跡技術(shù)（Western-blot），流式細胞技術(shù)（FCM），錄 PCR，實時熒光定量 PCR，Transwell 細胞遷移實驗，CFSE 細胞增殖檢術(shù)，酶聯(lián)免疫吸附測定技術(shù)（ELISA）。.3 實驗設(shè)計方案1）體內(nèi)實驗：利用 Lewis 肺癌細胞系構(gòu)建小鼠皮下移植瘤模型，在體內(nèi)驗證白藜蘆醇是夠通過調(diào)控 MDSCs 的擴增來影響腫瘤的發(fā)生發(fā)展。當腫瘤細胞皮下注射完，第二天即用相同體積的白藜蘆醇和 PBS 分別灌胃處理兩組模型鼠，連續(xù) 3 周。期間觀察白藜蘆醇對小鼠腫瘤生長進程的影響，檢測腫瘤生長相關(guān)的變化、并記錄各組小鼠的存活情況，同時進一步分析兩組荷瘤小鼠體內(nèi)各DSCs 和 CD8+T 細胞比率的差異（圖 1.3）。

【參考文獻】：
期刊論文
[1]洛伐他汀對谷氨酸誘導的興奮性毒性損害的神經(jīng)保護作用[J]. 馬濤,陳耀民,趙永波.  實用臨床醫(yī)藥雜志. 2008(09)



本文編號：3383836