丹參（Salvia miltiorrhiza）,作為鼠尾草屬中極有價值的藥用植物,具有活血,降血脂,抗腫瘤等生物活性。研究顯示,植物內生真菌能分泌一些和宿主相同或類似的活性化合物,因此,通過研究內生真菌的次級代謝產物來尋找新的藥源具有十分重要的研究意義。本研究對丹參內生真菌進行分離,鑒定和篩選,并對其中一株抗腫瘤細胞活性高的菌株進行培養(yǎng)基和發(fā)酵條件的優(yōu)化及次級代謝產物的分離鑒定,具體研究結果如下:1.采用8種選擇性培養(yǎng)基對丹參進行內生真菌的分離,共分到122株,根中分離到的真菌數(shù)量比莖、葉和花要多。形態(tài)學特征和ITS測序結果表明,分離的真菌屬于2個亞門、8個綱、10個目、13個科和20個屬。2.通過Alamar Blue法將濃度為100μg/m L的丹參內生真菌進行體外抗腫瘤細胞活性實驗,以抗腫瘤藥物5-氟尿嘧啶（5-Fu）作為陽性對照。初篩結果表明,對HepG2的抑制率高于50%的有10株;復篩顯示其中一株離蠕孢菌（Bipolaris sorokiniana）KLBMPSM007表現(xiàn)出較強的抗腫瘤細胞活性。3.以抗腫瘤細胞活性為主要的指標,對高活菌株KLBMPSM007的培養(yǎng)基和發(fā)酵... 

【文章來源】：江蘇師范大學江蘇省

【文章頁數(shù)】：122 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 緒論
    1.1 引言
    1.2 植物內生真菌
        1.2.1 植物內生真菌概述
        1.2.2 植物內生真菌多樣性
        1.2.3 植物內生真菌的生物活性
    1.3 丹參
        1.3.1 丹參概況
        1.3.2 丹參內生真菌研究進展
    1.4 選題背景
    1.5 本論文研究的目的、意義及內容
2 丹參可培養(yǎng)內生真菌多樣性
    2.1 材料與儀器
        2.1.1 培養(yǎng)基與試劑
        2.1.2 主要儀器
    2.2 實驗方法
        2.2.1 丹參樣品的采集
        2.2.2 丹參內生真菌的分離與純化
        2.2.3 表面消毒可靠性檢測方法
        2.2.4 丹參內生真菌的形態(tài)鑒定
        2.2.5 丹參內生真菌的分子鑒定
        2.2.6 丹參內生真菌多樣性及系統(tǒng)發(fā)育樹的構建
    2.3 實驗結果與討論
        2.3.1 表面消毒的可靠性
        2.3.2 表面滅菌條件的篩選
        2.3.3 丹參內生真菌的分離結果
        2.3.4 凝膠電泳結果
        2.3.5 丹參內生真菌多樣性初步分析
        2.3.6 系統(tǒng)發(fā)育樹的構建
        2.3.7 討論
    2.4 本章小結
3 丹參內生真菌代謝產物的抗腫瘤細胞活性初步探究
    3.1 材料與儀器
        3.1.1 材料
        3.1.2 主要試劑與溶液
        3.1.3 主要儀器
    3.2 實驗方法
        3.2.1 真菌粗提物的制備
        3.2.2 細胞的培養(yǎng)
        3.2.3 真菌粗提物抗腫瘤細胞活性的初篩
        3.2.4 真菌粗提物抗腫瘤細胞活性的復篩
        3.2.5 菌株KLBMPSM007不同有機相粗提物的抗腫瘤細胞活性
        3.2.6 菌株KLBMPSM007不同濃度的粗提物抗腫瘤細胞活性
    3.3 實驗結果與討論
        3.3.1 真菌粗提物的抗腫瘤細胞活性的初篩
        3.3.2 真菌粗提物的抗腫瘤細胞活性的復篩
        3.3.3 菌株KLBMPSM007不同有機相的抗腫瘤細胞活性
        3.3.4 菌株KLBMPSM007乙酸乙酯相的抗腫瘤細胞活性
        3.3.5 討論
    3.4 本章小結
4 菌株KLBMPSM007發(fā)酵培養(yǎng)基和發(fā)酵條件優(yōu)化
    4.1 材料與儀器
        4.1.1 材料
        4.1.2 主要儀器
    4.2 實驗方法
        4.2.1 種子液的制備
        4.2.2 對照實驗
        4.2.3 液體發(fā)酵培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件優(yōu)化
        4.2.4 固體發(fā)酵培養(yǎng)條件優(yōu)化
    4.3 實驗結果與討論
        4.3.1 液體發(fā)酵培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件優(yōu)化
        4.3.2 固體發(fā)酵培養(yǎng)條件優(yōu)化
        4.3.3 討論
    4.4 本章小結
5 菌株KLBMPSM007發(fā)酵產物化學成分初步研究
    5.1 材料與儀器
        5.1.1 材料
        5.1.2 試劑
        5.1.3 儀器
    5.2 實驗方法
        5.2.1 菌株KLBMPSM007的發(fā)酵培養(yǎng)
        5.2.2 菌株KLBMPSM007弱極性成分的GC-MS分析
        5.2.3 菌株KLBMPSM007的分離純化
        5.2.4 化合物抗腫瘤細胞活性檢測
    5.3 實驗結果與討論
        5.3.1 菌株KLBMPSM007弱極性成分的GC-MS分析
        5.3.2 化合物分離純化
        5.3.3 化合物結構鑒定
        5.3.4 化合物抗腫瘤細胞活性結果
        5.3.5 討論
    5.4 本章小結
6 總結與展望
    6.1 總結
    6.2 展望
附錄
參考文獻
致謝
作者簡介
學位論文數(shù)據(jù)集


【參考文獻】：
期刊論文
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碩士論文
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[2]道地產區(qū)丹參內生真菌組成及其功能的初步研究[D]. 王萌.成都中醫(yī)藥大學 2013
[3]野生稻內生真菌對水稻和煙草幼苗的促生作用研究[D]. 徐佰鴿.浙江大學 2012



本文編號：3368932