丹參（Salvia miltiorrhiza）,作為鼠尾草屬中極有價(jià)值的藥用植物,具有活血,降血脂,抗腫瘤等生物活性。研究顯示,植物內(nèi)生真菌能分泌一些和宿主相同或類似的活性化合物,因此,通過研究?jī)?nèi)生真菌的次級(jí)代謝產(chǎn)物來尋找新的藥源具有十分重要的研究意義。本研究對(duì)丹參內(nèi)生真菌進(jìn)行分離,鑒定和篩選,并對(duì)其中一株抗腫瘤細(xì)胞活性高的菌株進(jìn)行培養(yǎng)基和發(fā)酵條件的優(yōu)化及次級(jí)代謝產(chǎn)物的分離鑒定,具體研究結(jié)果如下:1.采用8種選擇性培養(yǎng)基對(duì)丹參進(jìn)行內(nèi)生真菌的分離,共分到122株,根中分離到的真菌數(shù)量比莖、葉和花要多。形態(tài)學(xué)特征和ITS測(cè)序結(jié)果表明,分離的真菌屬于2個(gè)亞門、8個(gè)綱、10個(gè)目、13個(gè)科和20個(gè)屬。2.通過Alamar Blue法將濃度為100μg/m L的丹參內(nèi)生真菌進(jìn)行體外抗腫瘤細(xì)胞活性實(shí)驗(yàn),以抗腫瘤藥物5-氟尿嘧啶（5-Fu）作為陽性對(duì)照。初篩結(jié)果表明,對(duì)HepG2的抑制率高于50%的有10株;復(fù)篩顯示其中一株離蠕孢菌（Bipolaris sorokiniana）KLBMPSM007表現(xiàn)出較強(qiáng)的抗腫瘤細(xì)胞活性。3.以抗腫瘤細(xì)胞活性為主要的指標(biāo),對(duì)高活菌株KLBMPSM007的培養(yǎng)基和發(fā)酵... 

【文章來源】：江蘇師范大學(xué)江蘇省

【文章頁數(shù)】：122 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 緒論
    1.1 引言
    1.2 植物內(nèi)生真菌
        1.2.1 植物內(nèi)生真菌概述
        1.2.2 植物內(nèi)生真菌多樣性
        1.2.3 植物內(nèi)生真菌的生物活性
    1.3 丹參
        1.3.1 丹參概況
        1.3.2 丹參內(nèi)生真菌研究進(jìn)展
    1.4 選題背景
    1.5 本論文研究的目的、意義及內(nèi)容
2 丹參可培養(yǎng)內(nèi)生真菌多樣性
    2.1 材料與儀器
        2.1.1 培養(yǎng)基與試劑
        2.1.2 主要儀器
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 丹參樣品的采集
        2.2.2 丹參內(nèi)生真菌的分離與純化
        2.2.3 表面消毒可靠性檢測(cè)方法
        2.2.4 丹參內(nèi)生真菌的形態(tài)鑒定
        2.2.5 丹參內(nèi)生真菌的分子鑒定
        2.2.6 丹參內(nèi)生真菌多樣性及系統(tǒng)發(fā)育樹的構(gòu)建
    2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論
        2.3.1 表面消毒的可靠性
        2.3.2 表面滅菌條件的篩選
        2.3.3 丹參內(nèi)生真菌的分離結(jié)果
        2.3.4 凝膠電泳結(jié)果
        2.3.5 丹參內(nèi)生真菌多樣性初步分析
        2.3.6 系統(tǒng)發(fā)育樹的構(gòu)建
        2.3.7 討論
    2.4 本章小結(jié)
3 丹參內(nèi)生真菌代謝產(chǎn)物的抗腫瘤細(xì)胞活性初步探究
    3.1 材料與儀器
        3.1.1 材料
        3.1.2 主要試劑與溶液
        3.1.3 主要儀器
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 真菌粗提物的制備
        3.2.2 細(xì)胞的培養(yǎng)
        3.2.3 真菌粗提物抗腫瘤細(xì)胞活性的初篩
        3.2.4 真菌粗提物抗腫瘤細(xì)胞活性的復(fù)篩
        3.2.5 菌株KLBMPSM007不同有機(jī)相粗提物的抗腫瘤細(xì)胞活性
        3.2.6 菌株KLBMPSM007不同濃度的粗提物抗腫瘤細(xì)胞活性
    3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論
        3.3.1 真菌粗提物的抗腫瘤細(xì)胞活性的初篩
        3.3.2 真菌粗提物的抗腫瘤細(xì)胞活性的復(fù)篩
        3.3.3 菌株KLBMPSM007不同有機(jī)相的抗腫瘤細(xì)胞活性
        3.3.4 菌株KLBMPSM007乙酸乙酯相的抗腫瘤細(xì)胞活性
        3.3.5 討論
    3.4 本章小結(jié)
4 菌株KLBMPSM007發(fā)酵培養(yǎng)基和發(fā)酵條件優(yōu)化
    4.1 材料與儀器
        4.1.1 材料
        4.1.2 主要儀器
    4.2 實(shí)驗(yàn)方法
        4.2.1 種子液的制備
        4.2.2 對(duì)照實(shí)驗(yàn)
        4.2.3 液體發(fā)酵培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件優(yōu)化
        4.2.4 固體發(fā)酵培養(yǎng)條件優(yōu)化
    4.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論
        4.3.1 液體發(fā)酵培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件優(yōu)化
        4.3.2 固體發(fā)酵培養(yǎng)條件優(yōu)化
        4.3.3 討論
    4.4 本章小結(jié)
5 菌株KLBMPSM007發(fā)酵產(chǎn)物化學(xué)成分初步研究
    5.1 材料與儀器
        5.1.1 材料
        5.1.2 試劑
        5.1.3 儀器
    5.2 實(shí)驗(yàn)方法
        5.2.1 菌株KLBMPSM007的發(fā)酵培養(yǎng)
        5.2.2 菌株KLBMPSM007弱極性成分的GC-MS分析
        5.2.3 菌株KLBMPSM007的分離純化
        5.2.4 化合物抗腫瘤細(xì)胞活性檢測(cè)
    5.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論
        5.3.1 菌株KLBMPSM007弱極性成分的GC-MS分析
        5.3.2 化合物分離純化
        5.3.3 化合物結(jié)構(gòu)鑒定
        5.3.4 化合物抗腫瘤細(xì)胞活性結(jié)果
        5.3.5 討論
    5.4 本章小結(jié)
6 總結(jié)與展望
    6.1 總結(jié)
    6.2 展望
附錄
參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡(jiǎn)介
學(xué)位論文數(shù)據(jù)集


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號(hào)：3368932