目的:篩選川芎揮發(fā)油中具有保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞作用的有效成分,并探討其有效成分藁本內(nèi)酯（LIG）對血管內(nèi)皮細(xì)胞保護(hù)作用的機(jī)制。方法:建立人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（HUVEC）糖氧剝奪-再灌注（OGD-R）損傷模型。采用MTT法篩選川芎揮發(fā)油中對HUVEC OGD-R損傷具有保護(hù)作用的有效成分;通過高內(nèi)涵（HCS）、蛋白印跡（Western Blot）等手段,探討LIG對OGD-R損傷HUVEC中PI3K-Akt信號通路的影響;復(fù)制斑馬魚血管新生障礙模型觀察LIG對血管新生的影響。1.川芎揮發(fā)油保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞有效成分篩選采用含有Na₂S₂O₄的無糖培養(yǎng)基培養(yǎng)12h模擬糖氧剝奪狀態(tài),再正常培養(yǎng)4h模擬再灌注狀態(tài),建立HUVEC OGD-R損傷模型;分別給予不同濃度的川芎揮發(fā)油、LIG、丁基苯酞（BP）、洋川芎內(nèi)酯A/I、歐當(dāng)歸內(nèi)酯A、川芎嗪（TMP）、阿魏酸,預(yù)給藥1 h,采用MTT法測定不同藥物對模型細(xì)胞活力的影響。選擇具有保護(hù)作用的LIG和BP,以20、40、60μM對HUVEC OGD-R損傷模型預(yù)給藥,檢測細(xì)胞內(nèi)MDA、SOD... 

【文章來源】：成都中醫(yī)藥大學(xué)四川省

【文章頁數(shù)】：127 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

PI3K-Akt通路及本研究中涉及的相關(guān)因子之間的關(guān)系

15圖 1-1 川芎揮發(fā)油的 GC-MS 圖譜表 1-1 川芎揮發(fā)油化學(xué)成分鑒定結(jié)果編號NO出峰時(shí)間/分鐘Retainedtime/min化合物名稱Compound name分子式Formula相對含量/ %Relative content/ %1 3.375 二甲基亞砜 Dimethyl sulfoxide C2H6OS 10.332 5.357 (1R)-(+)-α蒎烯 (1R)-(+)-α-pinene C10H160.413 6.399 檜烯 Sabinene C10H161.28

圖 2-1 各組 RNA 凝膠電泳圖右分別為 1.溶劑對照組，2.模型組，3.LIG60μM 組，4.LIG40μM 組，5. LT-PCR 檢測 mRNA 表達(dá)驗(yàn)前，進(jìn)行溫度梯度篩選，并進(jìn)行擴(kuò)增效率檢測。溫度法反應(yīng)程序，以 20 μl 為反應(yīng)體系，延伸時(shí)間 30 s，溫度擴(kuò)增曲線及熔解曲線為參考，以確定恰當(dāng)?shù)臄U(kuò)增溫度樣品以 5 倍稀釋為不同濃度，共 5 個(gè)組，采用相同的反系進(jìn)行檢測，計(jì)算 PCR 擴(kuò)增效率，效率在 90 %-110 %式實(shí)驗(yàn)采用試劑盒兩步法反應(yīng)程序，以 20μl 為反應(yīng)體NA 的 Ct 值。以β-Actin 為內(nèi)參，采用ΔΔCt 法計(jì)算 VEGRNA 的相對表達(dá)水平。每個(gè)實(shí)驗(yàn)組重復(fù) 3 次。PCR 擴(kuò)曲線、熔解曲線及熔解峰見圖 2-2，引物序列如下：

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