人參皂苷是人參的主要活性成分,廣泛分布于植物的根、莖、葉、花和果實(shí)中,具有抗炎、抗腫瘤、抗疲勞和增強(qiáng)免疫等多種藥理活性。人參皂苷中糖鏈部分的組成與其藥理活性密切相關(guān),改變糖鏈的組成能改變皂苷的藥理活性,因此制備一系列糖鏈組成不同的人參皂苷單體,對闡明人參皂苷藥理活性的構(gòu)效關(guān)系具有重要意義,同時(shí)為藥物開發(fā)提供更多的化合物資源。目前已鑒定出200余種人參皂苷,但大部分仍難以大量獲得,限制了其臨床應(yīng)用和工業(yè)化生產(chǎn)。其中,人參皂苷Rb2、Rb3和Rc由于極性相近,直接從人參總皂苷中分離難度大、收率低。本文利用多種特異性糖苷酶將與待分離皂苷相似的皂苷轉(zhuǎn)化成極性相差較大的稀有皂苷,再經(jīng)過硅膠層析柱分離制備出Rb2、Rb3和Rc三種單體皂苷,并分別以Rb2、Rb3和Rc為底物,酶法轉(zhuǎn)化制備出一系列稀有人參皂苷。本論文的主要研究結(jié)果如下:制備了能分別水解人參皂苷C-20位外側(cè)葡萄糖、吡喃型阿拉伯糖和呋喃型阿拉伯糖的糖苷酶Ccbgl3B、Bgp2和CS-abf,以及水解C-20內(nèi)側(cè)葡萄糖的糖苷酶Bglpc28。以富含人參皂苷Rb2的原人參二醇型總皂苷為底物,利用糖苷酶Ccbgl3B、CS-abf和Bgl... 

【文章來源】：東北師范大學(xué)吉林省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：65 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

人參皂苷結(jié)構(gòu)圖

圖 2-1 TLC 檢測硅膠柱分離產(chǎn)物 管-350 管收集產(chǎn)物 12:人參皂苷 Rb2 標(biāo)準(zhǔn)品 13：人參皂苷 Rb3 標(biāo)準(zhǔn)皂苷 Rc 標(biāo)準(zhǔn)品糖苷酶的制備和酶活測定轉(zhuǎn)化人參皂苷的重要工具，因此嘗試建立酶法對人參皂苷 Rb2。Ccbgl3B 是實(shí)驗(yàn)室構(gòu)建的重組糖苷酶，它具有專一性水解人參葡萄糖的功能。Bgp2 是根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道合成的重組糖苷酶，它 C-20 位外側(cè)吡喃型阿拉伯糖的功能。CS-abf 是根據(jù)文獻(xiàn)合成水解人參皂苷 C-20 位外側(cè)的呋喃型阿拉伯糖。Bglpc28 是實(shí)苷酶，它是內(nèi)切葡萄糖苷酶，它能夠水解 C-20 位內(nèi)側(cè)的葡萄糖糖苷酶的制備 的方法，制備四種重組糖苷酶的粗酶液，五種糖苷水解酶在實(shí)現(xiàn)可溶性表達(dá)，純化后均為單一條帶且大小與文獻(xiàn)中相符四種糖苷酶的酶學(xué)性質(zhì)進(jìn)行了表征。四種糖苷酶轉(zhuǎn)化單體皂苷

圖 2-2 TLC 檢測四種糖苷酶轉(zhuǎn)化人參皂苷1：Rb1、Rd 標(biāo)準(zhǔn)品 2：Rc 標(biāo)準(zhǔn)品 3：Rb1 底物 4：Rb1 轉(zhuǎn)化產(chǎn)物 5：Rb2 底物 6：Rb2 轉(zhuǎn)化產(chǎn)物 7：Rc 底物 8：Rc 轉(zhuǎn)化產(chǎn)物 9：Rb3 底物 10：Rb3 轉(zhuǎn)化產(chǎn)物 11：Rd 底物 12：Rd 轉(zhuǎn)化產(chǎn)物13：Rb2 標(biāo)準(zhǔn)品 14：Rb3、Rg3 標(biāo)準(zhǔn)品(2)糖苷酶的蛋白濃度和酶活測定根據(jù)表 2-2 中方法繪制蛋白濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果如圖 2-3。根據(jù)表 2-3 中方法繪制pNP 標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果如圖 2-4。四種糖苷酶的蛋白濃度和酶活力如表 2-6。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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[2]酶轉(zhuǎn)化法制備高活性人參稀有皂苷及低聚丹酚酸的研究[D]. 劉春瑩.吉林大學(xué) 2016

碩士論文
[1]人參皂苷Rh2調(diào)控白血病細(xì)胞凋亡及組蛋白乙酰化修飾的機(jī)制研究[D]. 陳益.重慶醫(yī)科大學(xué) 2018
[2]微生物轉(zhuǎn)化人參皂苷Re制備Rh1[D]. 明有山.遼寧科技大學(xué) 2017
[3]人參莖葉中提取分離人參皂苷等有效成分研究[D]. 雷磊.西北大學(xué) 2016
[4]生物轉(zhuǎn)化法制備人參皂苷F1及Rh1的研究[D]. 王宇.大連工業(yè)大學(xué) 2015
[5]人參飲品類食品加工過程中人參皂苷的變化規(guī)律研究[D]. 陳振.吉林農(nóng)業(yè)大學(xué) 2014
[6]人參各主要成分對機(jī)體作用的比較研究[D]. 賈執(zhí)瑛.上海交通大學(xué) 2013
[7]人參皂苷的結(jié)構(gòu)修飾及生物活性的研究[D]. 李微.吉林大學(xué) 2010



本文編號：3365836