研究背景急性肺損傷（ALI）是一種嚴(yán)重威脅人類生命的疾病,至今還無特殊有效的治療方法。中藥名方?jīng)鲭跎ⅲ↙GS）在臨床上可用于治療ALI,但是其潛在的藥理機制并不十分明確。本文重點研究LGS抑制內(nèi)毒素（LPS）所致ALI的作用機制。研究目的探討LGS抑制LPS所致ALI的作用機制,為涼膈散的臨床運用提供實驗數(shù)據(jù)支持。方法與結(jié)果1、采用噻唑藍(lán)法（MTT）評價LGS對小鼠巨噬細(xì)胞系RAW264.7的細(xì)胞毒性作用。MTT實驗的結(jié)果顯示,50,100,200μg/ml的LGS基本沒有細(xì)胞毒性（存活率>90%）。因此,選擇該濃度的LGS用于后續(xù)實驗研究。酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測非毒劑量LGS對RAW264.7細(xì)胞的炎癥模型中細(xì)胞炎癥因子白細(xì)胞介素-6（IL-6）、腫瘤壞死因子（TNF-α）、白細(xì)胞介素-1β（IL-1β）和炎癥相關(guān)因子ROS表達(dá)的影響。結(jié)果顯示,LGS以劑量依賴性的方式顯著抑制LPS誘導(dǎo)的RAW264.7細(xì)胞的IL-6、TNF-α、IL-11β和炎癥相關(guān)因子ROS的產(chǎn)生。綜合運用蛋白印跡法（Western blotting）、免疫熒光及熒光素酶報告基因?qū)嶒灒↙ucif... 

【文章來源】：南方醫(yī)科大學(xué)廣東省

【文章頁數(shù)】：77 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖２?ｍｉｃｒｏＲＮＡ的生物來源示意圖（摘自：ｈｔｔｐｓ：／／ｅｎ．ｗｉｋｉｐｅｄｉａ．Ｏｒｇ／ｗｉｋｉ／ｍｉｃｒｏＲＮＡ?）??Ｆｉｇｕｒｅ?３?ＭｉｃｒｏＲＮＡ?ｂｉｏｇｅｎｅｓｉｓ??５本文主要研究工作及意義??

相關(guān)因子ＲＯＳ的釋放??我們首先研宄了涼膈散在ＲＡＷ２６４．７細(xì)胞中的細(xì)胞毒性。用不同濃度的涼??膈散處理細(xì)胞２４小時后，用ＭＴＴ法測定細(xì)胞活力。如圖１－１Ａ所示，涼膈散??濃度為５０－２００?ｎｇ／ｍｌ時在ＲＡＷ２６４．７細(xì)胞中沒有明顯的細(xì)胞毒性（存活??率＞９０％）。因此，使用了這些濃度的涼膈散進(jìn)行后續(xù)的實驗。??ＬＰＳ可以刺激ＲＡＷ２６４．７巨噬細(xì)胞中促炎細(xì)胞因子ＩＬ－６、ＴＮＦ－ｏｔ、ＩＬ－１（３及??炎癥相關(guān)因子ＲＯＳ的產(chǎn)生，從而引起炎癥。為了評估涼膈散的抗炎作用，我們??檢測了給予涼膈散后ＬＰＳ刺激的ＲＡＷ２６４．７細(xì)胞上層清液中促炎因子ＩＬ－６、??ＴＮＦ－ａ、ＩＬ－ｌｐ、炎癥相關(guān)因子ＲＯＳ的產(chǎn)生的濃度。結(jié)果表明，ＲＡＷ２６４．７細(xì)胞??被ＬＰＳ?（１?ｎｇ／ｍｌ）刺激后上清中的ＩＬ－６產(chǎn)生增加。然而，在給予涼膈散處理后，??促炎細(xì)胞因子ＩＬ－６、ＴＮＦ－ｃｕ?ＩＬ－１Ｐ及炎癥相關(guān)因子ＲＯＳ得到了顯著抑制，且??具有較好的濃度依賴性（圖１－１Ｂ－Ｆ），這和我們先前的研宄是一致的［４４］。綜上??所述，這些結(jié)果表明涼膈散對ＬＰＳ刺激的ＲＡＷ２６４．７細(xì)胞產(chǎn)生的炎癥因子ＩＬ－６、??ＴＮＦ－ａ、ＩＬ－ｉｐ及炎癥相關(guān)因子ＲＯＳ的產(chǎn)生具有顯著的抑制作用。??２２??

??分別使用ｍｉＲ－２１激動劑和抑制劑來上調(diào)或抑制ｍｉＲ－２１的表達(dá)（圖２－２Ｂ和Ｃ）。??結(jié)果顯示，ｍｉＲ－２１?ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ抑制了?ＬＧＳ對ｍｉＲ－２１的上調(diào)（圖２－２Ｄ）。??Ａ?ｃ??｜?平??Ａ??２?＾?ｌｏ－??ｆ?：１—［廠??ＬＧＳ?＋??ＬＰＳ?（１?Ｍｇ／ｍｌ）?－?＋?＋??Ｂ．ｌ?ｃ?§??％?１４０－１?Ｉ?１－５－，??Ｉｆ?１２〇－??｜?＇＾１?■?々?Ｈ??２－？ｔ?ｒ

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[10]連翹顆粒和煎劑體外抗菌作用的觀察[J]. 林錦泉,鄺棗園,黃少偉,羅海燕.  中外醫(yī)療. 2011(10)

博士論文
[1]涼膈散對內(nèi)毒素型急性肺損傷肺組織水液轉(zhuǎn)運的影響及機制研究[D]. 王國全.南方醫(yī)科大學(xué) 2014

碩士論文
[1]涼膈散加味方治療膿毒癥急性肺損傷/急性呼吸窘迫綜合征的臨床觀察[D]. 劉明.河北醫(yī)科大學(xué) 2014
[2]涼膈散湯劑HPLC-DAD指紋圖譜及其主要成分抗炎作用初步研究[D]. 胡建蘭.南方醫(yī)科大學(xué) 2014
[3]機械通氣輔以加味涼膈散治療急性肺損傷/急性呼吸窘迫綜合癥療效觀察[D]. 王艷麗.廣州中醫(yī)藥大學(xué) 2009
[4]涼膈散解毒作用細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)調(diào)控機制的實驗研究[D]. 林慧.第一軍醫(yī)大學(xué) 2004



本文編號：3345182