目的白藜蘆醇被證實(shí)具有延長(zhǎng)壽命、抗氧化、抗衰老、抗炎癥等心血管保護(hù)作用,但其抗炎機(jī)制尚未完全清楚,近年研究證實(shí)CD40與其配體CD40L相互作用在動(dòng)脈粥樣硬化炎癥反應(yīng)中扮演著非常重要的角色,本研究旨在通過(guò)細(xì)胞及動(dòng)物實(shí)驗(yàn),模擬人體動(dòng)脈粥樣硬化模型,研究CD40/CD40L信號(hào)軸對(duì)血管內(nèi)皮炎性損傷和動(dòng)脈粥樣硬化的影響及機(jī)制,闡明白藜蘆醇通過(guò)SIRT1激活,調(diào)控CD40/CD40L信號(hào)通路抑制血管炎癥反應(yīng)及抗動(dòng)脈硬化的可能分子機(jī)制,發(fā)掘白藜蘆醇重要的生物學(xué)意義和臨床使用價(jià)值。方法:1.白藜蘆醇對(duì)HUVECs增殖活力及炎癥環(huán)境下釋放的炎癥因子、趨化因子和活性氧的影響,不同濃度TNF-α和白藜蘆醇作用于HUVECs,觀察細(xì)胞的增殖活力,ELISA法檢測(cè)細(xì)胞上清液的炎癥因子IL-6,趨化因子MCP-1的水平,流式細(xì)胞法檢測(cè)活性氧的水平。2.觀察SIRT1在白藜蘆醇作用下HUVEC內(nèi)的表達(dá)定位,細(xì)胞免疫熒光染色法檢測(cè)在白藜蘆醇、SIRT1小干擾RNA作用下SIRT1在TNF-α刺激的HUVECs內(nèi)細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核內(nèi)的表達(dá)定位。3.篩選白藜蘆醇干預(yù)TNF-α刺激的HUVECs后的差異表達(dá)基因,檢測(cè)SIR... 

【文章來(lái)源】：福建醫(yī)科大學(xué)福建省

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【學(xué)位級(jí)別】：博士

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原代培養(yǎng)臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài)（100×）

圖 1.1 原代培養(yǎng)臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài)（100×）注： A. 原代臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞 24 h 后貼壁。B. 原代臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞 48-72 h 后對(duì)數(shù)期生長(zhǎng)。C. 原代臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞 120 h 后呈“鋪路石”樣改變。3.1.2 VIII 因子相關(guān)抗原免疫熒光鑒定在熒光顯微鏡下可見(jiàn)臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)呈黃綠色熒光，核周尤其明顯，包核清楚，細(xì)胞輪廓清晰（圖 1.2）。

圖 1.3 倒置顯微鏡下觀察 VIII 因子相關(guān)抗原免疫組化鑒定 HUVECs（200 ×）注： 圖示內(nèi)皮細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)內(nèi)呈棕黃色沉淀。3.2 白藜蘆醇對(duì) TNF-α 誘導(dǎo)的 HUVECs 細(xì)胞增殖活力的影響。分別用 0.1，1，10，100 μg/L 的 TNF-α 干預(yù) HUVECs 細(xì)胞 24 h，與空白對(duì)照的 HUVECs 相比，HUVECs 細(xì)胞增殖活力呈濃度依賴性降低。10 μg/L TNF-α 與100 μg/L TNF-α 降低細(xì)胞增殖活力分別為 12.5%（P < 0.05）和 20.6%（P < 0.01）。0.1 μg/L 和 1 μg/L TNF-α 對(duì) HUVECs 的增殖活力無(wú)明顯改變。因此，在后續(xù)實(shí)驗(yàn)中，我們選用 10 μg/LTNF-α 作為藥物干預(yù)濃度。分別用 10，20，40，80 μmol/L 的白藜蘆醇干預(yù) HUVECs 細(xì)胞 4 h，與空白對(duì)照的 HUVECs 相比，80 μmol/L 的白藜蘆醇可顯著降低 HUVECs 的增殖活力 15.9%（P < 0.05）。10-40 μmol/L 的白藜蘆醇對(duì) HUVECs 的增殖活力無(wú)明顯改變。我們選擇 5，10，20 μmol/L 的白藜蘆醇預(yù)處理 4 h 后，再用一定濃度 10 μg/L


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