目的探討建立產(chǎn)黃酮的羅布麻懸浮細(xì)胞培養(yǎng)體系。方法采用亞硝酸鈉-硝酸鋁比色法測定樣品中總黃酮含量。結(jié)果將新疆羅布麻無菌種子苗莖段和葉片分別接種于附加0.5mg/L 2,4-D+0.05mg/L 6-BA的MS、B5、IS、WPM培養(yǎng)基上,其愈傷組織誘導(dǎo)率均為100%,且來源于WPM培養(yǎng)基上葉片誘導(dǎo)的愈傷組織狀態(tài)最佳,質(zhì)地疏松、生長較快。利用葉片在WPM上誘導(dǎo)的愈傷組織制備懸浮種子液,并優(yōu)化其接種量,發(fā)現(xiàn)生物量積累最大的接種量為30g/L。在此基礎(chǔ)上,分析了一個生長周期內(nèi)懸浮細(xì)胞的生長和黃酮累積量情況,發(fā)現(xiàn)懸浮細(xì)胞生長曲線和黃酮累積量類似"S"型,黃酮含量在培養(yǎng)的第21天達(dá)最大值,為30.69 mg/g（DW）,該含量顯著低于大田收獲期羅布麻葉片中的黃酮含量,卻高于莖和根中的含量。結(jié)論獲得了生長狀態(tài)好、質(zhì)地疏松適合懸浮培養(yǎng)的愈傷組織,并初步建立其懸浮培養(yǎng)體系,該研究為利用羅布麻懸浮細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)規(guī)模化商業(yè)生產(chǎn)黃酮等有用物質(zhì)奠定基礎(chǔ)。 

【文章來源】：時珍國醫(yī)國藥. 2020,31(04)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：3 頁

【部分圖文】：

懸浮種子液的制備

將上述篩選出的愈傷組織轉(zhuǎn)接至不含瓊脂的WPM液體培養(yǎng)基中,通過不斷過篩去除塊狀愈傷組織法,最終篩選出分散性好的細(xì)胞懸浮物(圖1)。在此基礎(chǔ)上,分析了10g/L、20g/L、30g/L、40g/L和50g/L等接種量對懸浮細(xì)胞活力和生長量的影響(圖3)。研究發(fā)現(xiàn),10g/L～30g/L接種量下的細(xì)胞活力在0.52左右,差異不顯著;40g/L和50g/L接種兩下的細(xì)胞活力在0.25左右,二者差異也不顯著。接種對懸浮細(xì)胞的鮮重比和干重的影響趨勢相同,均在30g/L時達(dá)最高值,分別為14.94 和12.40g/L。2.8.3 羅布麻懸浮細(xì)胞培養(yǎng)過程中細(xì)胞生長和黃酮的積累

在接種量優(yōu)化的基礎(chǔ)上,考察一個培養(yǎng)周期內(nèi)羅布麻懸浮細(xì)胞生長和黃酮積累的變化(圖4)。發(fā)現(xiàn)在一個培養(yǎng)周期內(nèi),羅布麻懸浮細(xì)胞活力呈先增加后降低趨勢,在第9天達(dá)最高值0.93。懸浮細(xì)胞的干重在一個培養(yǎng)周期內(nèi)呈現(xiàn)0～9d積累緩慢, 6～15d顯著增加,而后15～24d干重積累基本維持在12.60g/L。懸浮細(xì)胞中的黃酮含量在一個培養(yǎng)周期內(nèi)呈現(xiàn)先升高后降低趨勢。其中,黃酮含量在培養(yǎng)的第21d達(dá)最大值,為30.69 mg/g(DW)。2.8.4 羅布麻懸浮細(xì)胞與成熟植株中黃酮含量的比較分析

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號：3310512