背景:宮頸癌作為婦女最常見惡性腫瘤之一,嚴重威脅女性的身心健康。研發(fā)合理有效的治療藥物具有重要意義。高危型人乳頭瘤病毒的感染已被證實是最主要的病因,其致癌機理與病毒癌基因E6/E7過表達干擾細胞周期、抑制細胞凋亡從而導(dǎo)致細胞惡性增殖相關(guān)。E6/E7基因的復(fù)制、轉(zhuǎn)錄、翻譯是抗HPV病毒及其相關(guān)宮頸癌的重要分子靶點。紫草素作為中藥紫草的主要活性成分,已發(fā)現(xiàn)其可抑制宮頸癌Hela（HPV18型）增殖,并誘導(dǎo)其凋亡,其機制與影響caspase、ERK、P13K、ATK、mTOR、ROS/p38途徑有關(guān)。關(guān)于其對E6/E7 mRNA和蛋白表達的影響以及對感染HPV16型宮頸癌細胞的作用目前未見報道。目的:研究紫草素對感染HPV16型宮頸癌Caski細胞的增殖、凋亡以及對E6/E7基因表達的影響。方法:體外培養(yǎng)宮頸癌Caski細胞并進行HPV基因檢測,采用MTT法檢測不同濃度紫草素（1.25¹60）μmol/L作用于宮頸癌Caski細胞后細胞的存活率,流式細胞術(shù)觀察細胞凋亡率改變;DAPI染色觀察細胞凋亡形態(tài)學(xué)改變;采用qRT-PCR法檢測E6/E7 mRNA表達的變化,采用... 

【文章來源】：湖北醫(yī)藥學(xué)院湖北省

【文章頁數(shù)】：55 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

宮頸癌Caski細胞分型檢測結(jié)果比較(a.宮頸癌Caski細胞HPV分型結(jié)果b.HPV分型結(jié)果對照表)

.1 宮頸癌 Caski 細胞分型檢測結(jié)果比較(a.宮頸癌 Caski 細胞 HPV 分型結(jié)果 果對照表) 紫草素對宮頸癌 Caski 細胞增殖的影響預(yù)實驗紫草素濃度選擇根據(jù)是已有文獻報道紫草素抑制宮頸癌 Hela IC5018.9±1.1 μmol/L[26]，確定紫草素濃度為 1.25、2.5、5、10、2160 μmol/L，將其作用于宮頸癌 Caski 細胞 12 h、24 h、36 h 后，M到 12 h、36 h 時僅 20~40 μmol/L 才出現(xiàn)細胞存活率的改變（圖 2.2 Ph 時紫草素藥物濃度區(qū)間在 1.25~5 μmol/L 時細胞存活率無變化；ol/L 時存在隨著藥物濃度增加出現(xiàn)細胞存活率下降的梯度變化，差異意義（圖 2.2 P<0.05）；在 40~160 μmol/L 時細胞存活率差異無統(tǒng)計確定藥物作用最佳時間為 24 h，最佳濃度為 5、10、20、40 μmol/L，組的數(shù)量，后續(xù)實驗選取紫草素濃度為 5、10、20、40、80 μmol/L

2.3 紫草素對宮頸癌 Caski 細胞凋亡的作用以 0、5、10、20、40、80 μmol/L 的紫草素培養(yǎng)宮頸癌 Caski 細胞 24 h 后，用 Annexin V/PI 法觀察細胞凋亡變化，左下象限顯示活細胞，右下象限及右上象限分別顯示早期及晚期凋亡細胞，左上象限顯示死亡細胞。結(jié)果顯示未加藥組活細胞數(shù)高達 96.1%，凋亡及死細胞數(shù)目僅占 3.9%。反映出細胞在此時處于良好生長狀態(tài)。隨著紫草素濃度的加大，活細胞數(shù)開始逐漸減少，凋亡和死細胞數(shù)目逐漸增加（從 3.9%增加至 9.1%、28.9%、41.7%、88.1%、97.17%）（圖 2.3 ，圖 2.4）（P<0.01），與 MTT 所表現(xiàn)出的細胞存活率結(jié)果基本一致。

【參考文獻】：
期刊論文
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碩士論文
[1]新疆紫草水溶性成分開發(fā)利用的化學(xué)基礎(chǔ)研究[D]. 賀金華.新疆醫(yī)科大學(xué) 2005



本文編號：3279175