目的探討人參皂苷Rb1對利多卡因引起的神經(jīng)干細(xì)胞損傷的影響及作用機(jī)制。方法使用抗Nestin抗體、抗CD133抗體對原代神經(jīng)細(xì)胞進(jìn)行標(biāo)記,采用流式細(xì)胞儀根據(jù)分步分選出神經(jīng)干細(xì)胞,并利用實時熒光定量PCR（RT-qPCR）及免疫熒光染色法檢驗其干細(xì)胞特性。分別利用含有利多卡因或人參皂苷Rb1的培養(yǎng)液培養(yǎng)分離出的神經(jīng)干細(xì)胞,使用RT-qPCR和Western blot檢測利多卡因或Rb1對神經(jīng)干細(xì)胞c-Jun氨基末端激酶（JNK）信號通路分子及細(xì)胞凋亡相關(guān)分子表達(dá)的影響。利用利多卡因和Rb1共培養(yǎng)神經(jīng)干細(xì)胞,并檢驗Rb1對利多卡因誘導(dǎo)的神經(jīng)干細(xì)胞凋亡的影響。結(jié)果通過兩步篩選,獲得了較高純度的脊髓神經(jīng)干細(xì)胞。該干細(xì)胞表達(dá)神經(jīng)干細(xì)胞的標(biāo)記基因SOX2,并能夠向相關(guān)神經(jīng)細(xì)胞分化。利多卡因能夠激活JNK信號通路并誘導(dǎo)神經(jīng)干細(xì)胞的凋亡,而人參皂苷Rb1能夠抑制JNK信號通路的激活并能夠部分回復(fù)利多卡因處理誘導(dǎo)的神經(jīng)干細(xì)胞凋亡。結(jié)論人參皂苷Rb1能夠抑制利多卡因處理激活的JNK信號通路并回復(fù)由利多卡因處理引起的脊髓神經(jīng)干細(xì)胞凋亡。 

【文章來源】：安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報. 2020,55(09)北大核心

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小鼠原代脊髓神經(jīng)干細(xì)胞分離鑒定

配制含100 μmol/L人參皂苷干細(xì)胞培養(yǎng)液,用該培養(yǎng)液培養(yǎng)神經(jīng)干細(xì)胞48 h,相對定量檢測凋亡相關(guān)基因的變化。圖4A的結(jié)果顯示JNK信號通路激活相關(guān)的基因c-Jun、ATF2以及促進(jìn)凋亡相關(guān)的FasL的mRNA豐度降低,而抑制凋亡的基因Bcl2表達(dá)量提高。(t=3.371,P<0.05;t=14.22,P<0.001)。此外,相對定量結(jié)果顯示人參皂苷能夠提高神經(jīng)干細(xì)胞標(biāo)記基因SOX2的表達(dá),并抑制神經(jīng)元基因NeuN的表達(dá)(t=5.183,P<0.01;t=3.267,P<0.05),見圖4B。圖4C中,Western blot 結(jié)果顯示,人參皂苷加入后能夠減少P-JNK 蛋白含量(t=2.935,P<0.05),提示凋亡的Cleaved-caspase3表達(dá)量也減少(t=3.651,P<0.05)。2.5 人參皂苷抑制利多卡因誘導(dǎo)的神經(jīng)干細(xì)胞損傷

局部麻醉藥品對神經(jīng)系統(tǒng)及神經(jīng)干細(xì)胞有一定損傷,但是目前仍不清楚其具體的機(jī)制。許多中藥也被證明能夠修復(fù)神經(jīng)損傷,例如參附注射液能夠部分保護(hù)布比卡因?qū)ι窠?jīng)組織的損傷[8]。白藜蘆醇也能夠修復(fù)局麻藥羅哌卡因的部分神經(jīng)毒性[9]。但是目前臨床上仍然不能完全避免局麻藥對神經(jīng)組織的損傷作用,需要探索新的方案及藥物去減輕局麻藥的相關(guān)副作用。人參是我國的傳統(tǒng)藥用植物,其主要藥理活性成分為人參皂苷。人參皂苷化合物有40種,具有抗氧化、緩解心血管病變、減緩腫瘤發(fā)展、改善腦部缺血、調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)等功能[10]。原人參二醇代表成分人參皂苷Rb1已被證明在神經(jīng)系統(tǒng)中發(fā)揮重要作用,例如促進(jìn)神經(jīng)干細(xì)胞增殖[4]。但是,目前尚不清楚人參皂苷Rb1是否可抑制局部麻醉藥物造成的神經(jīng)干細(xì)胞損傷。圖4 人參皂苷Rb1對神經(jīng)干細(xì)胞的影響


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