抑郁癥（major depressive disorder,MDD）是一種以情緒壓抑、悲觀和失意為典型特征,在當(dāng)今社會(huì)中比較常見的精神疾病。抑郁癥不僅威脅著患者的健康與生活質(zhì)量,還給患者家屬帶來了巨大的精神與經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。抑郁癥發(fā)病原因復(fù)雜,目前已知的致病因素包括環(huán)境、遺傳、神經(jīng)生化等。海馬是邊緣系統(tǒng)中的一個(gè)重要腦區(qū),是負(fù)責(zé)機(jī)體學(xué)習(xí)與短暫記憶的主要部位,也是目前抑郁癥研究中涉及最多的腦區(qū)。當(dāng)機(jī)體受到各種類型的應(yīng)激或刺激時(shí),海馬會(huì)在結(jié)構(gòu)和功能方面表現(xiàn)出高度的可塑性。持續(xù)大量地給予皮質(zhì)酮會(huì)損壞海馬神經(jīng)元的結(jié)構(gòu),進(jìn)而對(duì)學(xué)習(xí)記憶和認(rèn)知功能造成損傷。雖然國內(nèi)外學(xué)者已對(duì)抑郁癥的發(fā)病機(jī)制做了大量研究,但其準(zhǔn)確機(jī)理仍有待進(jìn)一步探究。本研究建立皮質(zhì)酮（corticosterone,CORT）誘導(dǎo)的原代神經(jīng)元損傷模型,體外模擬抑郁癥發(fā)生時(shí)體內(nèi)糖皮質(zhì)激素水平增高導(dǎo)致的海馬受損過程,研究4-甲基瑞香素（7,8-dihydroxy-4-methylcoumarin,Dhmc）體外條件下對(duì)損傷神經(jīng)元的保護(hù)作用。通過禁水禁食、冰泳、熱泳、潮濕墊料、籠傾斜、夾尾、閃爍燈、擁擠合籠、搖晃、晝夜顛倒等每天隨機(jī)1～2種應(yīng)激方式... 

【文章來源】：陜西師范大學(xué)陜西省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：68 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖５：免疫熒光染色（２０Ｘ）??Ｆｉｇ．５．?Ｒｅｓｕｌｔｓ?ｏｆ?ｉｍｍｕｎｏｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ?ｓｔａｉｎｉｎｇ?（２０Ｘ）??

完全形成神經(jīng)元網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)。１５天左右，神經(jīng)元開始退化，胞體出現(xiàn)圓形空泡導(dǎo)致??胞體膨脹，逐漸萎縮死亡。一般情況原代培養(yǎng)的神經(jīng)元最多可以在體外培養(yǎng)２８天。??本實(shí)驗(yàn)我們采用第７天己經(jīng)成熟且生長狀況健康的神經(jīng)元進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)（圖４）。??２．３．２神經(jīng)元鑒定??由于本實(shí)驗(yàn)采用懷孕１９？２０天的ＳＤ大鼠胚胎海馬區(qū)作為神經(jīng)元原代培養(yǎng)的來??源，所以在提取神經(jīng)元的過程中會(huì)不可避免的混入一些雜質(zhì)細(xì)胞，如血管內(nèi)皮細(xì)??胞、膠質(zhì)細(xì)胞等。為了鑒定第７天培養(yǎng)的細(xì)胞中神經(jīng)元的純度及神經(jīng)元生長狀態(tài)，??我們使用神經(jīng)元樹突特異性標(biāo)記物ＭＡＰ－２對(duì)神經(jīng)元進(jìn)行免疫熒光染色。結(jié)果顯示：??免疫熒光檢測與形態(tài)學(xué)檢測結(jié)果相吻合。培養(yǎng)至第７天的神經(jīng)元胞體飽滿，軸突??交聯(lián)充分，神經(jīng)元純度較高，進(jìn)一步說明神經(jīng)元培養(yǎng)至第７天即可進(jìn)行后續(xù)的實(shí)??驗(yàn)（圖５）。??２．３．３?Ｄｈｍｃ細(xì)胞毒性結(jié)果??２、４、８、１６、３２和６４?ｐＭ的Ｄｈｍｃ與神經(jīng)元共培養(yǎng)２４?ｈ后，形態(tài)學(xué)結(jié)果顯??示各個(gè)濃度的Ｄｈｍｃ對(duì)神經(jīng)元的生長無明顯影響，細(xì)胞立體感明顯，胞體透亮飽??滿且神經(jīng)元之間交聯(lián)形成的神經(jīng)元網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)完整。ＭＴＴ法檢測細(xì)胞活性，不同濃??度Ｄｈｍｃ處理的細(xì)胞與正常組細(xì)胞相比

滿且神經(jīng)元之間交聯(lián)形成的神經(jīng)元網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)完整。ＭＴＴ法檢測細(xì)胞活性，不同濃??度Ｄｈｍｃ處理的細(xì)胞與正常組細(xì)胞相比，細(xì)胞活力無顯著差異。ＭＴＴ結(jié)果與細(xì)胞??成像結(jié)果一致，表明Ｄｈｍｃ在安全濃度內(nèi)對(duì)神經(jīng)元無毒性（圖６）。??２．３．４皮質(zhì)酮損傷神經(jīng)元實(shí)驗(yàn)結(jié)果??形態(tài)學(xué)結(jié)果顯示，５６０?｜ｘＭ和６４０?ｐＭ濃度的皮質(zhì)酮作用于神經(jīng)元２４?ｈ后即可??導(dǎo)致細(xì)胞明顯損傷，表現(xiàn)為胞體膨脹、包膜破損、神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)嚴(yán)重受損。ＭＴＴ法檢??測結(jié)果顯示，５６０＃和６４０?濃度的ＣＯＲＴ作用于神經(jīng)元２４?ｈ后，其細(xì)胞存活??率分別為５６．２５．１％和３８．０７％，作用于４８?ｈ后細(xì)胞存活率分別下降至４６．４４％和??２３．９０％，呈濃度和時(shí)間依賴性下降。ＭＴＴ結(jié)果與細(xì)胞成像結(jié)果表明ＣＯＲＴ對(duì)神經(jīng)??元的最佳損傷條件是５６０?ｐＭ作用２４?ｈ（圖７）。??１８??

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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碩士論文
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[2]慢性不可預(yù)見性應(yīng)激大鼠海馬喹啉酸對(duì)谷氨酸及其受體的調(diào)節(jié)[D]. 陳慧彬.陜西師范大學(xué) 2013



本文編號(hào)：3235355