發(fā)布時(shí)間：2021-06-14 13:47

　　目的:優(yōu)化轉(zhuǎn)化生長因子-β（Transforming Growth Factor-β,TGF-β）誘導(dǎo)A549細(xì)胞表型轉(zhuǎn)化的條件,評價(jià)虎杖主要單體成分（虎杖苷、白藜蘆醇及大黃素）對TGF-β誘導(dǎo)A549細(xì)胞表型轉(zhuǎn)化的干預(yù)作用。優(yōu)化血小板衍化生長因子-BB（Platelet Derived Growth Factor-BB,PDGF-BB）誘導(dǎo) A549 細(xì)胞表型轉(zhuǎn)化,評價(jià)虎杖主要成分對PDGF-BB誘導(dǎo)A549細(xì)胞表型轉(zhuǎn)化的干預(yù)作用。優(yōu)化TGF-β誘導(dǎo)WI-38細(xì)胞表型轉(zhuǎn)化的條件,評價(jià)虎杖主要單體成分對TGF-β誘導(dǎo)WI-38細(xì)胞表型轉(zhuǎn)化的干預(yù)作用。通過在細(xì)胞水平探討具有抗肺纖維化活性藥物與細(xì)胞表型轉(zhuǎn)化之間的相關(guān)性,發(fā)現(xiàn)可靠的蛋白評價(jià)靶點(diǎn),建立以間質(zhì)細(xì)胞表型特征轉(zhuǎn)化為依據(jù)的藥物評價(jià)篩選模型,以期為肺纖維化疾病在細(xì)胞水平藥物篩選和治療提供新的思路和依據(jù)。方法:1.虎杖主要單體成分對A549細(xì)胞毒性研究:取對數(shù)生長期A549細(xì)胞,種植于96孔板,以不同濃度的虎杖苷、白藜蘆醇、大黃素及芍藥苷藥液作用于A549細(xì)胞72 h,以MTT法檢測細(xì)胞活力值,評價(jià)虎杖主要單體成分對A549細(xì)胞的細(xì)胞毒性... 

【文章來源】：中央民族大學(xué)北京市 211工程院校 985工程院校

【文章頁數(shù)】：98 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖I-1參與IPF細(xì)胞關(guān)系圖

三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果??１．Ａ５４９細(xì)胞生長曲線??如圖２－１，?２Ｘ１０４？８Ｘ１０４／ｍＬＡ５４９細(xì)胞在分別經(jīng)過１２ｈ？１０８ｈ的正常培養(yǎng)后，其增殖??隨時(shí)間的增加而增加，在７２—８４?ｈ細(xì)胞出現(xiàn)緩滯，然后幵始迅速增加，７２?ｈ前細(xì)胞增殖與??時(shí)間成線性關(guān)系，因此，我們需要將研宄時(shí)長控制在７２?ｈ以內(nèi)。根據(jù)線性分析，細(xì)胞種植??在４Ｘ１０４？６Ｘ１０４／ｍＬ密度下最好，因此在后續(xù)的實(shí)驗(yàn)中，我們將選�。担兀保埃矗恚踢M(jìn)行種植??培養(yǎng)。??２?２３??１８?２００００／ｃｍ３?Ｉ?２?．?Ｉ??：?／?４００００／ｃｍ３?／??８”：?§１５??０＾４?－?０３??０?４－?１－?、ｒ?．．．．－?－Ｔ－?「?Ｔ－－—ｒ－－－－－－．．．．．．．ｒ－．．．．ｒ；?０?＂?１?＇?：■?＾?；?１?＇?：?＇?；??〇?１２?２４?３６?４３?６０?７２?８４?９６?１０８?０?１２?２４?３６?４８?６０?７２?８４?９６?１０８??Ｔ／ｈ?Ｔ／ｈ??３?３?ｎ??２５?６００００／ｃｍ３?ｒ?２５?ｉ?８００００／ｃｍ３?，??〇?１?＾＾??ＯＳ?〇３??０???：?ｉ?：?Ｔ?；?ｒ?—?０?＾?一Ｔ?—??－??０?１２?２４?３６?４８?６０?７２?８４?９６?１０８?０?１２?２４?３６?４８?６０?７２?８４?９６?１０８??Ｔ／ｈ?Ｔ，ｈ??圖２－１不同初濃度Ａ５４９細(xì)胞時(shí)間－增殖－效應(yīng)關(guān)系??Ｆｉｇ．?２－１?Ｔｈｅ?Ｔｉｍｅ－ａｃｔｉｖｉｔｙ?ｒｅ

鍘?鄒悸?�、大粨洳G蛻忠┸斬裕粒擔(dān)矗瓜赴?拘裕崳?２．１虎杖苷對Ａ５４９細(xì)胞活力影響結(jié)果??如圖２－２所示，Ａ５４９細(xì)胞經(jīng)不同濃度虎杖苷作用７２?ｈ后，在３１．２５？５００?ｐＭ濃度范圍??內(nèi)，虎杖苷對Ａ５４９細(xì)胞有一定抑制作用；經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析，各組與對照組比較有顯著性差異??（Ｐ＜０．０５），但均未見細(xì)胞死亡。在３１．２５？６２．５?ｐＭ的濃度范圍給藥，虎杖苷對Ａ５４９細(xì)胞??無抑制作用（Ｐ＞?０．０５）。??表格２－１不同濃度虎杖苷對Ａ５４９的抑制率（Ｍｅａｎ士ｓ，ｎ＝３）??Ｔａｂｌｅ?２－１?Ｔｈｅ?ｃｅｌｌ?ｖｉａｂｉｌｉｔｙ?ｒａｔｅ?ｏｆ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ?ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ?ｏｆ?Ｐｏｌｙｄａｔｉｎ?ｏｎ?Ａ５４９?ｃｅｌｌｓ?（Ｍｅａｎ?士?ＳＥ，?ｎ＝３）??Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ?ｏｆ?Ｐｏｌｙｄａｔｉｎ??＂?Ａ４５０?Ｃｅｌｌ?ｖｉａｂｉｌｉｔｙ?ｒａｔｅ?（％）???（ＭＭ）?????Ｃｏｎｔｒｏｌ?１．３１３５?±０．００１４??３１．２５?１．２９００±０．０５２３?９８．２１?±０．００??６２．５０?１．２２６１?±０．０１４４?９５．０５±３．８８??１２５?１．１９１８±０．０２５６?９７．２０±１．００＊??２５０?１．１３９６±０．０３４３?９５．６２±１．８５＊＊??５００?１．０９７０±０．０４０３?９６．２６±２．５２?＊＊＊??＊Ｐ＜０．０５

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]虎杖苷對TGF-β1誘導(dǎo)的人類肺泡上皮A549細(xì)胞EMT的影響[J]. 楊珺超,徐璐,宋康,王媛,高潤娣,陳瑞琳,曹羽.  中國中西醫(yī)結(jié)合雜志. 2016(04)
[2]虎杖藥理作用研究進(jìn)展[J]. 夏婷婷,楊珺超,劉清源,宋康.  浙江中西醫(yī)結(jié)合雜志. 2016(03)
[3]多種生長因子復(fù)合物釋放系統(tǒng)促人胚肺成纖維細(xì)胞增殖的作用[J]. 施麗泳,陳曉陽,黃琳琳,黃勤淼,曾奕明.  中華結(jié)核和呼吸雜志. 2015 (03)
[4]大黃素對肺纖維化大鼠的保護(hù)作用及部分機(jī)制研究[J]. 劉理靜,錢紅,張平.  中國藥理學(xué)通報(bào). 2015(02)
[5]虎杖的呼吸系統(tǒng)藥理作用及其分子機(jī)制[J]. 尹雯,朱丹.  中國藥物評價(jià). 2013(02)
[6]白藜蘆醇對大鼠肺纖維化逆轉(zhuǎn)作用的研究[J]. 李婉霜,張平,何平平,肖新洲.  臨床醫(yī)學(xué)工程. 2012(02)
[7]白藜蘆醇苷對大鼠肺間質(zhì)纖維化的防治作用[J]. 張艷,陳莉延,梁標(biāo).  中國中藥雜志. 2011(24)
[8]白藜蘆醇對博萊霉素致大鼠肺纖維化和NF-κBmRNA的影響[J]. 王在巖,張平,何平平,于小華.  臨床肺科雜志. 2011(09)
[9]Fibronectin: Functional character and role in alcoholic liver disease[J]. Razia S Aziz-Seible,Carol A Casey.  World Journal of Gastroenterology. 2011(20)
[10]大黃素對肺纖維化大鼠TGF-β1及smad3/7信號通路的影響[J]. 李玉花,許先榮,潘慶,陳明顯,周穎,李國平,周蘋,許琳.  中華中醫(yī)藥學(xué)刊. 2010(02)

碩士論文
[1]虎杖苷對TGF-β1誘導(dǎo)的人類肺泡上皮細(xì)胞A549細(xì)胞EMT的作用研究[D]. 徐璐.浙江中醫(yī)藥大學(xué) 2014



本文編號：3229954