發(fā)布時(shí)間：2021-06-09 08:51

　　目的:胞外多糖（EPS）是微生物在生長代謝過程中分泌到細(xì)胞外的一類多糖物質(zhì),具有抗腫瘤、免疫調(diào)節(jié)、抗炎等多種生物活性。海南醫(yī)學(xué)院裴華老師等人從海南紅樹林熱帶濕地海洋環(huán)境中分離到一株淡紫擬青霉菌,我們從中提取得到了該菌的胞外多糖（稱為PH-EPS）。巨噬細(xì)胞作為機(jī)體抗感染的第一道防線及腫瘤免疫的主要效應(yīng)細(xì)胞之一,在機(jī)體的免疫中起著至關(guān)重要的作用。本課題主要研究PH-EPS對(duì)巨噬細(xì)胞的免疫調(diào)節(jié)活性及其機(jī)制。方法:本研究選用巨噬細(xì)胞RAW264.7細(xì)胞株作為試驗(yàn)對(duì)象,將不同濃度的PH-EPS和巨噬細(xì)胞共培養(yǎng)24 h后用MTT檢測(cè)巨噬細(xì)胞存活率,獲得作用于RAW264.7細(xì)胞的最佳濃度范圍;將不同濃度的PH-EPS作用于RAW264.7細(xì)胞后檢測(cè)培養(yǎng)液中NO的含量;不同濃度PH-EPS作用于RAW264.7細(xì)胞后將其裂解并用Western blotting檢測(cè)誘導(dǎo)型一氧化氮合酶（iNOS）、IκB-α及MAPK通路的蛋白磷酸化水平;采用酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）檢測(cè)RAW264.7巨噬細(xì)胞分泌腫瘤壞死因子-α（TNF-α）和白細(xì)胞介素-1β（IL-1β）的濃度;通過流式細(xì)胞儀檢測(cè)RAW26... 

【文章來源】：海南醫(yī)學(xué)院海南省

【文章頁數(shù)】：78 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

PH-EPS對(duì)RAW264.7細(xì)胞活力的影響

海南醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文的影響，本研究后面的實(shí)驗(yàn)選用 PH-EPS 0 μg/ml ~ 600 μg/ml 的濃度AW264.7 細(xì)胞進(jìn)行后繼的相關(guān)實(shí)驗(yàn)。圖 1 數(shù)據(jù)的均值、標(biāo)準(zhǔn)差和 P 值等詳見 1。.2 PH-EPS 誘導(dǎo) RAW264.7 細(xì)胞 NO 生成及 iNOS 的表達(dá)巨噬細(xì)胞能被脂多糖（LPS）等多種生物活性物質(zhì)激活，激活后的巨噬細(xì)產(chǎn)生腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細(xì)胞介素-6（IL-6）、白細(xì)胞介素-1β（IL-及 NO 等多種炎癥介質(zhì)[16, 17]。NO 作為細(xì)胞內(nèi)一種重要的信使分子，在清除物和殺死腫瘤細(xì)胞中起重要作用。NO 是由 NO 合成酶（NOS）催化產(chǎn)生，誘導(dǎo)型一氧化氮合酶（iNOS）是誘導(dǎo) NO 產(chǎn)生的主要酶分子[42]。

其中 200 μg/ml、600 μg/ml 時(shí) NO 的含量分別為 LPS 處理組的 1/2，2/3，說明PH-EPS 作用較 LPS 溫和。圖 2 數(shù)據(jù)的均值、標(biāo)準(zhǔn)差和 P 值等詳見附表 2。由于細(xì)菌內(nèi)毒素（LPS）污染也可以引起巨噬細(xì)胞 NO 表達(dá)的增多，因?yàn)镻H-EPS 分離于淡紫擬青霉菌，理論上可能含有一定數(shù)量的 LPS，為了排除PH-EPS 誘導(dǎo) NO 的生成與內(nèi)毒素污染相關(guān)，我們使用 LPS 的抑制劑-多粘菌素 B（PMB）來了解 PH-EPS 處理巨噬細(xì)胞時(shí)是否受到了 LPS 的干擾。將 50 μg/ml多粘菌素 B 預(yù)處理 RAW264.7 細(xì)胞后再加入 PH-EPS 和 LPS 處理 RAW264.7 細(xì)胞，24 h 后同樣用 Griess 試劑盒檢測(cè)培養(yǎng)液中 NO 的含量。結(jié)果如圖 2 所示，PMB預(yù)處理后，LPS 誘導(dǎo)的 RAW264.7 巨噬細(xì)胞 NO 生成受到明顯抑制，NO 水平接近沒有任何處理的正常細(xì)胞水平，相反 PMB 預(yù)處理后并沒有影響 PH-EPS 誘導(dǎo)的 NO 生成的水平。這些結(jié)果說明導(dǎo)致巨噬細(xì)胞生成 NO 的主要原因是 PH-EPS本身，而與內(nèi)毒素污染無關(guān)。圖 2 數(shù)據(jù)的均值、標(biāo)準(zhǔn)差和 P 值等詳見附表 3。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]靈芝多糖對(duì)脂多糖誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞TLR4/NF-κB通路調(diào)控及下游炎癥因子的影響[J]. 楊燕燕,謝金東,周建華,林瑋,王訓(xùn)立.  實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與比較醫(yī)學(xué). 2018(06)
[2]阿里紅多糖組分對(duì)小鼠脾淋巴細(xì)胞免疫功能的影響[J]. 米仁沙·牙庫甫,祖麗胡瑪爾·阿卜杜合力力,木尼薩·迪力夏提,叢媛媛,帕麗達(dá)·阿不力孜.  食品安全質(zhì)量檢測(cè)學(xué)報(bào). 2018(16)
[3]多糖的研究進(jìn)展[J]. 劉德文,劉秀波,豐緒霞.  林業(yè)科技情報(bào). 2018(03)
[4]香菇多糖的藥理活性研究進(jìn)展[J]. 萬茜淋,任雨賀,劉淑瑩.  中國藥房. 2018(08)
[5]巨噬細(xì)胞真菌多糖受體研究進(jìn)展[J]. 苗月,任桂紅,金周雨,趙飛,宋慧.  中國細(xì)胞生物學(xué)學(xué)報(bào). 2017(05)
[6]紅樹林淡紫擬青霉胞外多糖對(duì)小鼠DCs表型成熟的影響[J]. 胡海巖,王華民,林英姿,常彩紅,楊文,王永霞.  中國免疫學(xué)雜志. 2017(02)
[7]紅樹林淡紫擬青霉EPS提取物體外抗HSV-1機(jī)制研究[J]. 王永霞,胡海巖,楊文,牛莉娜,裴華,常彩紅,饒朗毓,王麗欣,林英姿.  中國病原生物學(xué)雜志. 2017(01)
[8]淡紫擬青霉菌的研究進(jìn)展[J]. 李葉,李有志.  華中昆蟲研究. 2016(00)
[9]豬苓多糖誘導(dǎo)M2亞型巨噬細(xì)胞向M1巨噬細(xì)胞轉(zhuǎn)化[J]. 江澤波,趙晉,李思明,胡金萍,曾星.  中國免疫學(xué)雜志. 2015(08)
[10]藥用真菌多糖抗腫瘤免疫生物活性研究進(jìn)展[J]. 李六文,趙剛.  中華腫瘤防治雜志. 2015(14)

碩士論文
[1]南極海洋菌胞外多糖對(duì)巨噬細(xì)胞免疫活性及其機(jī)制的研究[D]. 李晶.皖南醫(yī)學(xué)院 2014
[2]南海灘涂紅樹林海洋木生真菌分類研究[D]. 彭紅艷.廣東海洋大學(xué) 2012



本文編號(hào)：3220276