目的探討黃芪甲苷（AS-Ⅳ）對高糖（HG）環(huán)境下人腎小球系膜細胞（HMCs）增殖和氧化應(yīng)激損傷保護作用及其可能機制。方法采用MTT方法檢測高糖作用不同時間點時及不同濃度AS-Ⅳ干預(yù)后HMCs增殖情況;采用實時熒光定量PCR（qPCR）、Western blot方法分別檢測不同濃度AS-Ⅳ干預(yù)高糖環(huán)境下HMCs 48 h后核因子E2相關(guān)因子2（Nrf2）、血紅素氧合酶1（HO-1）、誘導(dǎo)型一氧化氮合酶（iN-OS）、細胞間黏附分子-1（ICAM-1）mRNA及其蛋白表達;采用過氧化氫（H₂O₂）、總超氧化物歧化酶（T-SOD）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）、丙二醛（MDA）試劑盒分別檢測不同濃度AS-Ⅳ干預(yù)高糖環(huán)境下HMCs 48 h后細胞上清液中H₂O₂、T-SOD、GSH-Px、MDA含量變化。結(jié)果 MTT法結(jié)果顯示,與正常（NG）組比較,高糖環(huán)境下HMCs呈過度增殖趨勢（P<0.05）,不同濃度AS-Ⅳ干預(yù)48 h后,與HG組比較,各用藥組明顯地抑制了高糖環(huán)境下HMCs過度增殖且呈劑... 

【文章來源】：安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報. 2017,52(07)北大核心

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不同時間點時及不同濃度AS-Ⅳ對高糖環(huán)境下HMCs增殖影響

圖2高糖作用不同時間點時對HMCs中Nrf2、HO-1、iNOS、ICAM-1蛋白水平的影響A:Nrf2;B:HO-1;C:iNOS;D:ICAM-1;1:NG組;2:HG6h組;3:HG12h組;4:HG24h組;5:HG36h組;6:HG48h組;與NG組比較:*P＜0.05，＊＊P＜0.01表2AS-Ⅳ對高糖環(huán)境下HMCs上清液中H2O2、MDA、T-SOD、GSH-Px含量變化影響組別H2O2(mmol/L)MDA(nmol/ml)T-SOD(U/ml)GSH-Px(U)NG2．804±0．9651．349±0．48522．910±1．69841．377±14．189HG27．116±7．766＊＊4．606±0．459＊＊16．055±2．430＊＊9．359±5．065＊＊HG+AS-Ⅳ10μmol/L23．909±4．7323．609±0．211#19．353±1．3537．797±0．176HG+AS-Ⅳ25μmol/L22．451±5．1633．179±0．320##20．176±1．110##19．712±1．445HG+AS-Ⅳ50μmol/L12．702±4．349#2．737±0．421##20．711±1．175##36．058±12．980##HG+AS-Ⅳ100μmol/L11．577±1．560#1．968±0．419##22．190±1．538##53．366±14．903##與NG組比較:＊＊P＜0.01;與HG組比較:#P＜0.05，##P＜0.013討論DN是糖尿病中最常見且最嚴重的慢性微血管并發(fā)癥，現(xiàn)已經(jīng)發(fā)展成為終末期腎臟疾病的首要原因［4］。研究［5］表明，MCs異常增殖、腎小球肥大和細胞外基質(zhì)過多蓄積是DN病理變化的主要特征，最終導(dǎo)致腎臟纖維化。本實驗研究顯示，高糖能夠促進HMCs過度增殖，與之前的研究［2］結(jié)論相一致。課題組前期研究［2］顯示，高糖培養(yǎng)的MCs內(nèi)出現(xiàn)了ROS過度生成的現(xiàn)象。而ROS的大量生成與細胞內(nèi)氧化/抗氧化系統(tǒng)失衡有密切關(guān)系。本研究結(jié)果顯示，高糖刺激HMCs后，細胞上清液中H2O2和

圖3不同濃度AS-Ⅳ對高糖環(huán)境下HMCs中Nrf2、HO-1、iNOS、ICAM-1蛋白表達水平的影響A:Nrf2;B:HO-1;C:iNOS;D:ICAM-1;1:NG組;2:HG組;3:HG+AS-Ⅳ10μmol/L組;4:HG+AS-Ⅳ25μmol/L組;5:HG+AS-Ⅳ50μmol/L組;6:HG+AS-Ⅳ100μmol/L組;與NG組比較:＊＊P＜0.01;與HG組比較:#P＜0.05，##P＜0.01H2O2、MDA的含量;增加了HMCs上清液中T-SOD、GSH-Px的活性。提示AS-Ⅳ可能通過抗氧化作用，抑制了HMCs過度增殖。研究［6－8］表明，腎臟中過多表達的ROS不僅能夠造成持續(xù)的氧化應(yīng)激和降低有關(guān)抗氧化酶的表達，如降低SOD、GSH-Px等的表達，還能夠活化許多細胞因子并且促進ICAM-1的產(chǎn)生，最終啟動和參與糖尿病患者腎臟纖維化的發(fā)展。另外，腎小球系膜細胞作為腎小球固有細胞，過多分泌的ICAM-1能夠引起腎小球和管狀基底膜增厚，加快腎小球硬化和腎小管間質(zhì)纖維化，進一步加速DN的進程［9－10］。有研究［11－12］已經(jīng)證實，iNOS是腎臟中一氧化氮合酶(nitricoxidesynthase，NOS)的主要亞型，作為氧化應(yīng)激中的關(guān)鍵酶，一旦被誘導(dǎo)表達將在早期DN的發(fā)展中起到至關(guān)重要的作用，造成腎臟損傷。本研究顯示，高糖能夠上調(diào)HMCs中的iNOS和ICAM-1的表達，而AS-Ⅳ干預(yù)48h后則抑制了iNOS和ICAM-1的上調(diào)表達，提示AS-Ⅳ可能是通過下調(diào)iNOS和ICAM-1的表達，進一步抑制HMCs過度增殖減緩DN的進程。Nrf2是細胞氧化應(yīng)激反應(yīng)中的關(guān)鍵因子之一，也是細胞抗氧化還原的中樞調(diào)節(jié)者，通過調(diào)節(jié)抗氧化基因的表達實現(xiàn)對細胞免遭氧化應(yīng)激的損傷［13］。當細胞遭受到氧化應(yīng)激刺激后，結(jié)合在胞質(zhì)內(nèi)無轉(zhuǎn)錄活性的Nrf2與環(huán)氧氯丙烷相關(guān)蛋白1(Keap1)相解離，使得大量

【參考文獻】：
期刊論文
[1]黃芪總苷對實驗性糖尿病小鼠心肌保護作用的研究[J]. 韓佳,李衛(wèi)平,欒家杰,李維祖.  安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報. 2012(03)



本文編號：3215830